利用正交设计法对叉叶苏铁ISSR—PCR反应体系的优化研究

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比较CTAB法和SDS法提取叉叶苏铁(Cycas micholitzii)的总DNA,发现CTAB法是提取叉叶苏铁总DNA的较好方法;对叉叶苏铁ISSR-PCR反应体系中的4个主要因素dNTPs,Taq DNA聚合酶,引物及Mg^2+进行最优条件筛选;采用单因素法探讨DNA模板量、退火温度和循环次数的最佳反应条件,建立了适合于叉叶苏铁的最佳ISSR—PCR反应体系(20μL体系):1×Buffer,75ng DNA模板,dNTPs250μmol·L^-1,Tatl酶1.0U,引物0.2
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