Hippo通路对小鼠骨髓间充质干细胞分化增殖及迁移的调控作用

来源 :中华危重病急救医学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lijie6857272
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目的

探讨Hippo通路对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)分化、增殖、迁移能力的调控效应。

方法

采用直接贴壁法分离培养C57BL/6小鼠原代BMSCs,取第6~7代细胞,通过流式细胞仪检测和诱导其成骨、成软骨、成脂分化并进行鉴定,通过非接触共培养诱导BMSCs向AECⅡ细胞分化。通过2 -脱氧- D -葡萄糖(2-DG)及哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)抑制剂9E1调节Hippo通路,用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测2-DG及9E1对BMSCs表面活性蛋白(SPB、SPC和SPD)mRNA和表面活性蛋白C前体(pro-SPC)蛋白表达的影响,以评估Hippo通路对BMSCs向AECⅡ细胞分化的作用;用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测BMSCs的数量变化(用0.1、0.5、1.0、5.0 mmol/L的2-DG干预),以评估Hippo通路对BMSCs增殖能力的影响;用划痕实验及Transwell小室迁移实验评估Hippo通路对BMSCs水平迁移及向急性呼吸窘迫综合征(ARDS)肺组织归巢能力的影响。

结果

2-DG呈浓度依赖性激活Hippo通路并促进BMSCs向AECⅡ细胞分化及增殖,其效应在2-DG浓度5 mmol/L时最为明显〔SPB mRNA(2-ΔΔCT):2.42±0.28比1.89±0.11,SPC mRNA(2-ΔΔCT):8.06±0.68比6.59±0.79,SPD mRNA(2-ΔΔCT):6.45±0.37比5.27±0.28,pro-SPC/β-actin:5.80±1.86比4.93±1.18,细胞增殖:(145.46±18.18)%比(98.91±4.36)%,均P<0.05〕;9E1可抑制BMSCs向AECⅡ细胞分化及增殖〔SPB mRNA(2-ΔΔCT):1.32±0.17比1.89±0.11,SPC mRNA(2-ΔΔCT):3.91±0.34比6.59±0.79,SPD mRNA(2-ΔΔCT):3.38±0.25比5.27±0.28,pro-SPC/β-actin:2.48±0.17比4.93±1.18,细胞增殖:(80.00±7.27)%比(98.91±4.36)%,均P<0.05〕。2-DG活化Hippo通路能促进BMSCs的水平迁移〔划痕愈合程度:(27.17±3.53)%比(52.45±6.52)%,P<0.05〕及向ARDS肺组织归巢〔迁移细胞数(倍,相对于对照):2.77±0.21比1.90±0.19,P<0.05〕,而9E1抑制Hippo通路能逆转上述效应〔划痕愈合程度:(79.89±8.42)%比(52.45±6.52)%,迁移细胞数(倍,相对于对照):1.69±0.13比1.90±0.19,均P<0.05〕。

结论

活化Hippo通路能促进BMSCs向AECⅡ细胞分化、增殖、水平迁移,并增强BMSCs向ARDS肺组织归巢的能力。

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