观察免疫检查点分子B7-H3过表达对骨肉瘤细胞系MG63、U2OS、K7M2增殖和转移的影响。
方法通过慢病毒介导的基因过表达技术,构建骨肉瘤细胞系MG63、U2OS、K7M2的对照组(空载体组)和实验组(B7-H3过表达组)细胞。在体外环境下,应用氮兰四唑盐/吩嗪硫酸甲酯(MTS/PMS)实验和克隆形成实验检测细胞增殖能力;应用划痕实验,检测细胞迁移能力。使用免疫健全的BALB/c小鼠,构建皮下成瘤模型和肺转移模型,检测体内环境下骨肉瘤细胞增殖和转移能力。应用Graph Pad 8统计软件分析,组间比较采用t检验分析。
结果MTS/PMS实验结果显示,培养6 d后,MG63、U2OS、K7M2实验组细胞吸光度(A)值(2.466±0.229、2.244±0.163、2.404±0.241)均比对照组(1.821±0.189、1.929±0.164、2.008±0.111)显著增高,差异有统计学意义(t=4.852、3.040、3.338,P< 0.05);克隆形成实验结果显示,在培养10 d后,MG63、K7M2实验组细胞形成的克隆数[(24.333±4.163)、(32.667±6.028)个]明显高于对照组[(6.667±2.517)、(15.333±3.215)个],差异有统计学意义(t=6.290、4.395,P< 0.05),而U2OS实验组与对照组细胞形成的克隆数[(20.333±3.786)个比(19.667±3.055)个],差异无统计学意义(t=0.237,P>0.05)。划痕实验结果显示,3种骨肉瘤细胞实验组与对照组比较,在划痕愈合率方面的差异均无统计学意义。小鼠皮下成瘤模型表明,过表达B7-H3在体内环境下可以显著促进骨肉瘤的增殖。小鼠肺转移模型表明,过表达B7-H3在体内环境下可以显著促进骨肉瘤的转移。
结论过表达B7-H3在体外环境可部分增强骨肉瘤细胞的增殖,而在体内环境下可显著促进骨肉瘤的形成和转移。