【摘 要】
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为构建一种安全有效的传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)与多杀性巴氏杆菌二联亚单位疫苗,通过在线生物软件对APP的外毒素Apx Ⅳ与Pm的外膜蛋白H(OmpH)基因进行T细胞和B细胞表位筛选;将筛选的优势抗原表位序列通过连接肽连接后,构建新肽段(命名为New),并利用在线生物信息软件对其进行分析;分别将Apx Ⅳ、OmpH和New基因序列通过同源重组的方法构建至真核表达载体GV658,通过双酶切验证目的 基因的大小;将新构建的3种重组质粒转染HEK293细胞,CCK-8试验评估其对细胞的安全性;RT-PCR和
【机 构】
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天津农学院动物科学与动物医学学院天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室,天津300384
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为构建一种安全有效的传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)与多杀性巴氏杆菌二联亚单位疫苗,通过在线生物软件对APP的外毒素Apx Ⅳ与Pm的外膜蛋白H(OmpH)基因进行T细胞和B细胞表位筛选;将筛选的优势抗原表位序列通过连接肽连接后,构建新肽段(命名为New),并利用在线生物信息软件对其进行分析;分别将Apx Ⅳ、OmpH和New基因序列通过同源重组的方法构建至真核表达载体GV658,通过双酶切验证目的 基因的大小;将新构建的3种重组质粒转染HEK293细胞,CCK-8试验评估其对细胞的安全性;RT-PCR和Western blot验证外源基因蛋白的转录和表达情况;免疫荧光(IFA)验证重组质粒中外源基因蛋白在细胞中的免疫定位.结果 显示,New肽段具有较好的免疫源性,所构建的重组质粒GV658-Apx Ⅳ、GV658-OmpH和GV658-New双酶切结果与目的 基因大小相符,可转染HEK293细胞并成功表达,且对HEK293细胞无明显损伤作用.本研究所构建的3种质粒等比混合,可用于制备APP与Pm二联亚单位疫苗.
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