【摘 要】
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目的:建立一种新型Lewis血型抗原的合成方法，即利用羊驼噬菌体展示纳米抗体库筛选Lewis血型抗原的模拟表位，并将模拟表位序列进行生物合成。方法:用单克隆抗Lewis a （Lea）抗体亲和淘选羊驼噬菌体展示纳米抗体文库来选择Lea抗原的模拟表位。利用酶联免疫吸附试验（ELISA）对阳性克隆菌与筛选原Lea单克隆抗体的亲和力进行检测，选择高亲和力的阳性克隆菌进行测序，并对最终确定的序列进行表达合
【基金项目】
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中国人民解放军总医院创新计划项目（NO.CX19006）；
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目的:建立一种新型Lewis血型抗原的合成方法，即利用羊驼噬菌体展示纳米抗体库筛选Lewis血型抗原的模拟表位，并将模拟表位序列进行生物合成。方法:用单克隆抗Lewis a （Lea）抗体亲和淘选羊驼噬菌体展示纳米抗体文库来选择Lea抗原的模拟表位。利用酶联免疫吸附试验（ELISA）对阳性克隆菌与筛选原Lea单克隆抗体的亲和力进行检测，选择高亲和力的阳性克隆菌进行测序，并对最终确定的序列进行表达合成。最后通过ELISA法对合成后的Lea模拟抗原进行灵敏度、特异度以及临床样本的验证。结果:随机挑取96个噬菌体克隆，有24个阳性克隆，并选取亲和力最强的前14个噬菌体克隆进行测序，结果显示有5个不同序列，选取出现频率最高、差异最大、亲和力最高的3条序列进行表达合成。利用ELISA法检测筛选得到的Lea模拟抗原的灵敏度及特异性，发现微柱凝胶法与ELISA法的最低检出限相差25倍，且Lea模拟抗原与其他5种单抗（anti-A, anti-B, anti-P1, anti-M, anti-N）没有交叉反应（P<0.001）。最后，检测了30例临床血浆样本(15例Lea+,15例Lea-),结果显示，15例阳性血浆样本的吸光度的均值高于阴性血浆样本，且具有统计学差异（P=0.02）,但临床样本的阳性信号值远低于单抗的阳性信号值。结论:初步建立了利用羊驼噬菌体纳米抗体库筛选Lea模拟抗原的方法，有望实现Lea模拟抗原表位的筛选，从而实现ELISA、化学发光等高灵敏度检测方法在血型抗体鉴定方面的应用。
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