【摘 要】
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本研究旨在探讨异甘草素(ISL)对脂多糖(LPS)诱导的RAW 264.7小鼠巨噬细胞炎性反应的影响,及其线粒体相关机制.以体外培养RAW 264.7巨噬细胞为研究对象,采用MTT法考察ISL(5,10,20 μmol/L)对RAW 264.7细胞活力的影响,Griess法检测NO含量,ELISA法检测TNF-α水平,荧光增强ATP试剂盒检测胞内ATP水平.荧光探针结合流式细胞术检测细胞总体和线粒体源ROS水平以及线粒体膜电势和线粒体质量数.免疫印迹法检测细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)以及调控线粒体
【机 构】
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烟台大学生命科学学院,线粒体与健康衰老研究中心,山东烟台264005
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本研究旨在探讨异甘草素(ISL)对脂多糖(LPS)诱导的RAW 264.7小鼠巨噬细胞炎性反应的影响,及其线粒体相关机制.以体外培养RAW 264.7巨噬细胞为研究对象,采用MTT法考察ISL(5,10,20 μmol/L)对RAW 264.7细胞活力的影响,Griess法检测NO含量,ELISA法检测TNF-α水平,荧光增强ATP试剂盒检测胞内ATP水平.荧光探针结合流式细胞术检测细胞总体和线粒体源ROS水平以及线粒体膜电势和线粒体质量数.免疫印迹法检测细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)以及调控线粒体生物发生相关蛋白的表达水平.qRT-PCR检测线粒体生物发生相关基因表达水平.结果 表明,LPS成功诱导了炎症模型,ISL能够显著降低RAW 264.7细胞中NO、TNF-α的释放以及显著降低iNOS蛋白水平且呈浓度依赖性,ISL还可显著降低LPS诱导的RAW 264.7细胞内DCFH-DA和MitoSOX荧光强度水平,改善线粒体膜电势以及胞内ATP水平,显著降低由LPS刺激RAW 264.7细胞线粒体质量数的升高.另外,ISL还可改善由LPS诱导RAW 264.7细胞线粒体生物发生和动力学相关蛋白表达水平.本研究证实了ISL可以改善线粒体功能,减轻LPS诱导的炎症反应,提示ISL可以改善由LPS所致线粒体功能障碍.
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