目的 运用网络药理学和动物实验验证，探讨京制牛黄解毒片治疗口腔溃疡（Oral ulcer,OU）的作用机制。方法 通过中药成分数据库（TCMSP、TCMID）筛选出京制牛黄解毒片组成药物的主要化学成分及其潜在靶点；通过Genecards、OMIM、Drugbank和PharmGKB数据库获得OU疾病相关基因；利用cytoscape3.8.2软件构建药物-化学成分-靶点-疾病网络图；采用STRING数据库构建靶点相互作用（Protein-protein interaction,PPI）网络。采用R软件（4.0.4）将京制牛黄解毒片中化学成分预测靶点和OU疾病的共同靶点进行基因本体（Gene ontology,GO）及基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）富集分析；最后通过复制大鼠口腔溃疡模型，对京制牛黄解毒片治疗口腔溃疡的药效及核心信号通路进行验证。结果 经数据库分析，共获得京制牛黄解毒片29个关键活性成分，核心靶点包括Mitogen-activated protein kinase 1/3（MAPK1/3）、Protein kinase B（AKT1/PKB）、Signal transducer and activator of transcription（STAT3）、Heat shock protein90（HSP90）、Vascular endothelial growth factor（VEGF）、Interleukin-6（IL-6）、Epidermal growth factor receptor（EGFR）等，GO功能富集和KEGG通路富集主要影响PI3K-AKT（Phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B）、Tumor necrosis factor（TNF）、Interleukin-17（IL-17）及Hypoxia-inducible factor 1（HIF-1）等信号通路。大鼠实验证实京制牛黄解毒片可显著减小溃疡面积，明显改善口腔溃疡程度和溃疡的病理变化，显著降低血清促炎因子TNFα、IL-1β、IL-6和Interferon γ（IFN-γ）水平，升高抗炎因子IL-4水平；同时显著降低溃疡组织VEGF蛋白水平。结论 京制牛黄解毒片具有多成分、多靶点、多通路的作用特点，对大鼠实验性口腔溃疡具有治疗作用，其作用机制与调节炎症信号通路有关，为后续京制牛黄解毒片临床应用和机制研究提供了参考。