基于NF-κB通路探讨芪红通络方对深静脉血栓形成大鼠血管内皮细胞的保护作用

来源 :中国实验方剂学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:luobo330
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目的:探讨芪红通络方对深静脉血栓形成(DVT)大鼠血管内皮细胞的保护作用与机制。方法:取66只SD大鼠采用随机数字表分为对照组(11只)、建模组(55只),后者通过减慢血流+损伤血管内皮建立DVT模型,并将建模成功大鼠按照随机数字表分为模型组、阿司匹林组、芪红通络方低、中、高剂量组。阿司匹林组予以200mg/kg阿司匹林灌胃,芪红通络方低、中、高剂量组分别予以1.3、2.6、5.2mL/kg芪红通络方流浸膏灌胃,模型组和对照组分别予以生理盐水灌胃,每天1次,连续7d。处死大鼠,取腹主动脉血采用酶联免疫法(ELISA)检测血清内皮素-1(ET-1)、白介素-6(IL-6)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察血管内皮组织病理改变;透射电镜观察血管内皮细胞超微结构;噻唑蓝(MTT)法检测血管内皮细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测血管内皮细胞LDH释放水平;实时逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测血管内皮组织血小板活化因子(PAF)、核转录因子-κB(NF-κB)、Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)、Ras相关的C3肉毒素底物2(Rac2)信使核糖核酸(mRNA)表达;蛋白质免疫印迹法(WB)检测血管内皮组织PAF、NF-κB、Rac1、Rac2蛋白表达。结果:模型组血管内皮细胞严重损伤并大量脱落,细胞肿胀明显,有大量炎性细胞附着,电镜下可见胞核固缩变形,线粒体高度肿胀,胞质空泡化严重,内弹力膜暴露;芪红通络方3剂量组和阿司匹林组血管内皮组织及其超微结构损伤均有不同程度改善;与对照组比,模型组、阿司匹林组和芪红通络方3剂量组血清ET-1、IL-6水平、血管内皮细胞活力、血管内皮组织PAF、NF-κB、Rac1、Rac2 mRNA和蛋白表达明显升高,血管内皮细胞LDH释放水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比,阿司匹林组和芪红通络方3剂量组血清ET-1、IL-6水平、血管内皮细胞活力、血管内皮组织PAF、NF-κB、Rac1、Rac2 mRNA和蛋白表达均降低,血管内皮细胞LDH释放水平升高,其中芪红通络方的作用呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:芪红通络方对DVT大鼠血管内皮细胞有保护作用,能防治血栓的形成,推测是通过抑制PAF、NF-κB、Rac1和Rac2的表达,降低血清ET-1、IL-6的水平实现的。
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