【摘 要】
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目的 探讨微小RNA(miRNA)let-7i对胶质瘤U251干细胞成熟分化的影响及其调控机制. 方法 (1)体外培养胶质瘤U251细胞,磁珠分选出CD133阳性细胞,通过合成let-7imimics(let-7i mimics组)及let-7i control (let-7i control组)转染U251干细胞,实时荧光定量PCR验证转染后let-7i表达水平,Western blotting
【机 构】
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上海交通大学附属苏州九龙医院神经外科,苏州,215021;江苏大学附属昆山医院神经外科,苏州,215300;
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目的 探讨微小RNA(miRNA)let-7i对胶质瘤U251干细胞成熟分化的影响及其调控机制. 方法 (1)体外培养胶质瘤U251细胞,磁珠分选出CD133阳性细胞,通过合成let-7imimics(let-7i mimics组)及let-7i control (let-7i control组)转染U251干细胞,实时荧光定量PCR验证转染后let-7i表达水平,West blotting检测U251干细胞转染前后CD133、巢蛋白(nestin)和LIN28表达水平,利用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色U251干细胞评价其成熟分化水平.(2)LIN28 siRNA(LIN28 siRNA组)及siRNA control(siRNA control组)转染U251干细胞后,Westblotting检测转染前后CD133和nestin表达水平.(3)利用Targetscan软件分析及荧光素酶报告系统验证LIN28是let-7i靶基因的可能性. 结果 (1)转染let-7i mimics的U251干细胞中let-7i显著过表达,为let-7i control组的17.9倍;CD133、nestin和LIN28表达水平分别是let-7i control组13.9％、43.7％和53.6％;GFAP阳性标记指数为(83.0±1.93)％,显著高于let-7i control组[(39.7±6.73)％],差异有统计学意义(P＜0.05).(2)LIN28 siRNA转染U251干细胞后CD133和nestin表达水平分别下调为siRNA control组的23.7％和37.9％.(3)Targetscan软件分析表明LIN28 3UTR存在let-7i的配对结合位点,荧光素酶报告系统证明LIN28是let-7i的靶基因. 结论 过表达let-7i可显著下调CD133及nestin的表达水平,促进胶质瘤干细胞的成熟分化,其机制可能是通过下调LIN28表达.
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