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对野生大杯蕈（Ｃｌｉｔｏｃｙｂｅ ｍａｘｉｍａ）原生质体的分离再生及再生菌株的构建进行研究，以纤维素酶、溶壁酶、崩溃酶、β－葡萄糖苷酸酶的去壁效果最好，而新生酶，几丁质酶，蜗牛酶的云壁效果较差。２种以上的酶液混合使用能提高去壁效果。酶解液在０．１％￣２．０％浓度范围内原生质体释放量随酶解液的浓度升高几乎呈直线上升。酶解３￣５ｈ释放的原生质体最多。酶解液ｐＨ值在５．０￣６．０范围内原生质体的产量较高