【摘 要】
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为了研究kallistatin（Kal）的生物活性,本实验构建了可分泌表达Kal的毕赤酵母菌株。首先通过PCR方法从pAAV-Kal中扩增出KalcDNA,并克隆至酵母表达载体pPIC9,得到甲醇酵母分泌型表达载体pPIC9-Kal,然后将载体线性化并电击转化毕赤酵母GS115（his4）,通过MD平板筛选出阳性表达菌株。阳性表达菌株在BMMY培养基（pH7.0）中29℃培养,经2%甲醇诱导表达9
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划（863计划）（No.2008AA02Z135）； 国家科技重大专项课题（No.2009ZX09103-643）； 国家自然科学基金（No.30973591）资助～～；
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为了研究kallistatin（Kal）的生物活性,本实验构建了可分泌表达Kal的毕赤酵母菌株。首先通过PCR方法从pAAV-Kal中扩增出KalcDNA,并克隆至酵母表达载体pPIC9,得到甲醇酵母分泌型表达载体pPIC9-Kal,然后将载体线性化并电击转化毕赤酵母GS115（his4）,通过MD平板筛选出阳性表达菌株。阳性表达菌株在BMMY培养基（pH7.0）中29℃培养,经2%甲醇诱导表达96h,摇瓶表达量可达14mg/L。表达上清经PhenylSuperose、Heparin SepharoseFF分离纯化,目的蛋白纯度达到98%,分子量为58kDa。生物活性实验显示,所得到的Kal蛋白具有较好的抗氧化活性,过氧化物酶活性达到（163±4）U/（mg·min）,可有效降低H2O2对LX-2细胞的氧化损伤。另外,重组产生的Kal还能抑制HUVEC细胞的增殖。本研究首次成功地利用毕赤酵母表达系统分泌表达了有生物活性的Kal,为继续开展其抗肿瘤活性奠定了基础。
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