【摘 要】
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目的筛选并验证可调控结肠癌细胞增殖的微小RNA（miRNA）。方法以癌基因线粒体转录因子A（TFAM）作为靶基因，通过miRWalk 2.0软件筛选可能调控结肠癌增殖的miRNA。通过实时荧光定量PCR检测miRNA在30例结肠癌手术标本和3种结肠癌细胞系（SW480、HT-29和HCT116）中的表达。选取其中表达量最低的miR-204和SW480进行后续研究。双荧光素酶报告基因实验验证TFAM
【机 构】
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510080广州，中山大学附属第一医院胃肠外科中心,510080广州，中山大学附属第一医院胃肠外科中心,510080广州，中山大学附属第一医院胃肠外科中心,510080广州，中山大学附属第一医院胃肠外
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目的筛选并验证可调控结肠癌细胞增殖的微小RNA（miRNA）。
方法以癌基因线粒体转录因子A（TFAM）作为靶基因，通过miRWalk 2.0软件筛选可能调控结肠癌增殖的miRNA。通过实时荧光定量PCR检测miRNA在30例结肠癌手术标本和3种结肠癌细胞系（SW480、HT-29和HCT116）中的表达。选取其中表达量最低的miR-204和SW480进行后续研究。双荧光素酶报告基因实验验证TFAM和miR-204的作用关系。分别应用miR-204慢病毒和anti-miR-204慢病毒上调和下调miR-204的表达，通过Western blot检测慢病毒感染后SW480细胞中TFAM蛋白水平的变化；并采用MTT实验和BrdU实验观察慢病毒感染后SW480细胞增殖能力的变化。
结果初筛获得miR-204、miR-211、miR-214、miR-381、miR-590-3p 5种miRNA，其中miR-204、miR-211、miR-214和miR-381在结肠癌组织中的表达较癌旁组织明显降低（P<0.05），在3种结肠癌细胞中的表达亦较正常结肠细胞降低（P<0.05），其中miR-204的表达量最低；而miR-590-3p表达水平则在结肠癌组织和3种结肠癌细胞中均明显上调（P<0.05）。结肠癌组织中miR-204表达与TFAM表达呈显著负相关（P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验显示TFAM与miR-204可直接结合。通过慢病毒感染上调miR-204表达后，SW480细胞中TFAM蛋白表达下降，细胞增殖能力升高（P<0.05）；下调miR-204表达后，TFAM蛋白表达升高，细胞增殖能力下降（P<0.05）。
结论miR-204可以通过降低TFAM的蛋白表达来抑制结肠癌细胞的增殖。
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