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【摘 要】 乌苯美司胶囊可增强免疫功能，用于抗癌化疗、放疗的辅助治疗，老年性免疫功能缺
陷等。该实验通过对苯美司胶囊2010年版中国药典二部的含量均匀度测定方法进行验证，结果表明该方法可以准确测定乌苯美司的含量均匀度，可用于产品的质量控制。
【关键词】 乌苯美司胶囊 含量均与度 方法学验证
【中图分类号】 R927.2 【文献标识码】 A 【文章编号】 1671-5160（2014）03-0200-02
1 概述
本方法学验证研究所用样品信息：样品名称：乌苯美司胶囊，规格：30mg，批号：130101 130102 130103
2 试验研究内容
2.1 乌苯美司胶囊含量均匀度方法学验证
2.1.1 方法选择
参照乌苯美司胶囊含量测定项下检测方法拟定本方法，按照2010版《中国药典》附录中药品质量标准分析方法验证指导原则要求，对该方法进行了验证。
2.1.2 仪器及色谱条件
选用HPLC法作为含量均匀度的测定方法。仪器：Waters2695液相色谱仪，2487紫外检测器，色谱柱柱：Inertsil ODS-3 5μ 150×4.6 （mm），柱温：40℃，流动相：甲醇-0.6%磷酸二氢钠溶液（45：55），流速：1.0ml/min，检测波长：254nm，试剂：甲醇（色谱纯）、磷酸二氢钠（AR）、水（重蒸水）
拟定方法：取本品1粒，置于研钵中研细，将细粉倾入25ml量瓶中，研钵用适量的0.1mol/L盐酸溶液分次洗净，洗液并入量瓶中，充分振摇使乌苯美司溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。按照上述仪器及色谱条件，精密量取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图；另取105℃干燥至恒重的乌苯美司对照品，精密称定，同法配制成每1ml约含1.2mg乌苯美司的溶液，作为对照品溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。理论板数以乌苯美司峰计应不低于3500。
2.1.3 方法学考查
2.1.3.1 检测波长的选择
精密称取乌苯美司对照品约30mg，置于25ml量瓶中，用适量的0.1mol/L盐酸溶液溶解后用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。照分光光度法（中国药典2010年版二部附录ⅣA），在200nm～400nm波长范围内进行扫描，在252nm、257nm与263nm的波长处有最大吸收。
另取空白辅料溶液，在200nm～400nm波长范围内进行扫描，空白辅料溶液在252nm、257nm与263nm的波长处均无紫外吸收。参照本品含量测定项下的检测波长，故选择254nm作为检测波长。
2.1.3.2 干扰试验
称取处方量的辅料，按照上述方法配制空白辅料溶液，精密量取20ul注入液相色谱仪，按照上述色谱条件测定，记录色谱图，结果表明，空白辅料无干扰。
2.1.3.3 线性关系考查
取乌苯美司对照品，分别配制浓度为0.4mg/ml，0.8mg/ml，1.2mg/ml，1.6mg/ml，2.0mg/ml的溶液，精密量取20ul注入液相色谱仪，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，试验结果表明，在0.4～2.0mg/ml的浓度范围内，浓度与峰面积呈良好线性关系。线性方程为y=542549x+8510，r=0.9998。
2.1.3.4 重复性试验
取样品，按拟定方法配制1份样品溶液，作为供试品溶液，连续测定6次；另取105℃干燥至恒重的乌苯美司对照品适量，精密称定，同法配制成每1ml约含1.2mg乌苯美司的溶液，作为对照品溶液，分别精密量取20ul供试品及对照品溶液，注入液相色谱仪，依法测定。6个样品的含量（%）分别为：99.1，99.1，98.9，99.2，99.1，99.1，含量均值（%）：99.1， RSD（%）：0.10。试验结果表明，该方法重复性良好。
2.1.3.5 回收率考查
取乌苯美司对照品，按含量均匀度测定浓度的130%、100%和70%制备样品，每个浓度称取3份，分别与辅料混合，按拟定方法配制、测定，求出回收率。
乌苯美司胶囊含量均匀度主药回收率测定结果
试验结果表明，回收率良好。
2.1.3.6 溶液穩定性试验
取本品颗粒，置于研钵中研细，将细粉倾入25ml量瓶中，研钵用适量的0.1mol/L盐酸溶液分次洗净，洗液并入量瓶中，充分振摇使乌苯美司溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。在室温下放置，分别于0，1，2，4，6，8小时取样20ul，注入液相色谱仪，按照拟定方法测定，记录测定值，各时间段含量（%）分别为：99.1，98.9，99.2，99.0，99.3，98.7，含量均值（%）：99.1，RSD（%）：0.09。试验结果表明，该样品溶液在8小时内稳定性良好。
2.1.3.7 耐用性试验
取本品颗粒，分别用不同色谱柱，不同流动相比例，按照拟定方法测定，记录色谱图，色谱图中杂质峰应与主峰分离度良好，理论塔板数应符合要求。参照乌苯美司胶囊含量测定方法及中国药典乌苯美司胶囊含量均匀度方法，柱温均为40℃。结果显示流动相比例为甲醇：盐相（45：55），甲醇：盐相（39：61），甲醇：盐相（51：49），色谱柱为色谱柱：4.6*150mm Inertsil ODS-3，色谱柱4.6*150mmDiamonsil。含量均匀度的测定结果在98.7%-99.1%之间，RSD（%）：0.17。表明该法耐用性良好。
2.1.4 含量均匀度测定法.
根据上述方法学验证的结果，最终确定含量均匀度测定方法为： 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.6%磷酸二氢钠溶液（45∶55）为流动相；柱温为40℃；检测波长为254nm。理论板数按乌苯美司峰计算不低于3500。
测定法取本品1粒，置于研钵中研细，将细粉倾入25ml量瓶中，研钵用适量的0.1mol/L盐酸溶液分次洗净，洗液并入量瓶中，充分振摇使乌苯美司溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。精密量取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图。另取105℃干燥至恒重的乌苯美司对照品适量，精密称定，同法配制成每1ml约含1.2mg乌苯美司的溶液，作为对照品溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。
2.1.5 含量均匀度测定结果
按照确定的方法对130101、130102、130103三批次乌苯美司胶囊进行含量均匀度测定，每批10个样品。130101测定结果分别为（%）：97.9，98.0，98.9，99.1，99.5，97.6，97.5，97.8，99.9，100.3，A+1.80s=3.19；130102測定结果分别为（%）：99.9，98.3，99.6，98.3，100.0，98.5，98.7，100.6，98.0，100.0，A+1.80s=2.47；130103测定结果分别为（%）：98.5，99.9，98.0，98.1，100.2，98.2，99.8，100.5，99.6，98.7，A+1.80s=2.55；由试验结果可知，三批样品的含量均匀度均符合A+1.80s≤15.0的要求。
3 讨论
经过对乌苯美司胶囊含量均匀度测定方法从检测波长的选择，干扰试验，线性关系考查，重复性试验，回收率考查，溶液稳定性试验，耐用性试验等验证，证实该方法测定乌苯美司胶囊含量均匀度科学，准确，可用于产品的质量控制。同时和上市同类产品的质量对比研究显示了2产品质量基本一致。均符合药典规定的要求。
参考文献
[1] 《中国人民共和国药典》2010年版二部
[2] 吴金萍，朱晓燕，蔡旭萍.高效液相色谱法测定乌苯美司胶囊中乌苯美司含量[J].中国科技博览. 2010， （13）
[3] 王巍.乌苯美司胶囊含量测定方法方法学验证[J]《科协论坛（下半月刊）》.2013， （9）
[4] 刘仲义，黄萍.高效液相色谱法测定乌苯美司及其胶囊的含量[J]《药物分析杂志》 1993年第13卷第6期，396-399
作者简介：姚阳，1978.10.10，女，汉族，陕西西安人，陕西瑞盛生物科技有限公司，本科，执业药师
陷等。该实验通过对苯美司胶囊2010年版中国药典二部的含量均匀度测定方法进行验证，结果表明该方法可以准确测定乌苯美司的含量均匀度，可用于产品的质量控制。
【关键词】 乌苯美司胶囊 含量均与度 方法学验证
【中图分类号】 R927.2 【文献标识码】 A 【文章编号】 1671-5160（2014）03-0200-02
1 概述
本方法学验证研究所用样品信息：样品名称：乌苯美司胶囊，规格：30mg，批号：130101 130102 130103
2 试验研究内容
2.1 乌苯美司胶囊含量均匀度方法学验证
2.1.1 方法选择
参照乌苯美司胶囊含量测定项下检测方法拟定本方法，按照2010版《中国药典》附录中药品质量标准分析方法验证指导原则要求，对该方法进行了验证。
2.1.2 仪器及色谱条件
选用HPLC法作为含量均匀度的测定方法。仪器：Waters2695液相色谱仪，2487紫外检测器，色谱柱柱：Inertsil ODS-3 5μ 150×4.6 （mm），柱温：40℃，流动相：甲醇-0.6%磷酸二氢钠溶液（45：55），流速：1.0ml/min，检测波长：254nm，试剂：甲醇（色谱纯）、磷酸二氢钠（AR）、水（重蒸水）
拟定方法：取本品1粒，置于研钵中研细，将细粉倾入25ml量瓶中，研钵用适量的0.1mol/L盐酸溶液分次洗净，洗液并入量瓶中，充分振摇使乌苯美司溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。按照上述仪器及色谱条件，精密量取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图；另取105℃干燥至恒重的乌苯美司对照品，精密称定，同法配制成每1ml约含1.2mg乌苯美司的溶液，作为对照品溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。理论板数以乌苯美司峰计应不低于3500。
2.1.3 方法学考查
2.1.3.1 检测波长的选择
精密称取乌苯美司对照品约30mg，置于25ml量瓶中，用适量的0.1mol/L盐酸溶液溶解后用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。照分光光度法（中国药典2010年版二部附录ⅣA），在200nm～400nm波长范围内进行扫描，在252nm、257nm与263nm的波长处有最大吸收。
另取空白辅料溶液，在200nm～400nm波长范围内进行扫描，空白辅料溶液在252nm、257nm与263nm的波长处均无紫外吸收。参照本品含量测定项下的检测波长，故选择254nm作为检测波长。
2.1.3.2 干扰试验
称取处方量的辅料，按照上述方法配制空白辅料溶液，精密量取20ul注入液相色谱仪，按照上述色谱条件测定，记录色谱图，结果表明，空白辅料无干扰。
2.1.3.3 线性关系考查
取乌苯美司对照品，分别配制浓度为0.4mg/ml，0.8mg/ml，1.2mg/ml，1.6mg/ml，2.0mg/ml的溶液，精密量取20ul注入液相色谱仪，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，试验结果表明，在0.4～2.0mg/ml的浓度范围内，浓度与峰面积呈良好线性关系。线性方程为y=542549x+8510，r=0.9998。
2.1.3.4 重复性试验
取样品，按拟定方法配制1份样品溶液，作为供试品溶液，连续测定6次；另取105℃干燥至恒重的乌苯美司对照品适量，精密称定，同法配制成每1ml约含1.2mg乌苯美司的溶液，作为对照品溶液，分别精密量取20ul供试品及对照品溶液，注入液相色谱仪，依法测定。6个样品的含量（%）分别为：99.1，99.1，98.9，99.2，99.1，99.1，含量均值（%）：99.1， RSD（%）：0.10。试验结果表明，该方法重复性良好。
2.1.3.5 回收率考查
取乌苯美司对照品，按含量均匀度测定浓度的130%、100%和70%制备样品，每个浓度称取3份，分别与辅料混合，按拟定方法配制、测定，求出回收率。
乌苯美司胶囊含量均匀度主药回收率测定结果
试验结果表明，回收率良好。
2.1.3.6 溶液穩定性试验
取本品颗粒，置于研钵中研细，将细粉倾入25ml量瓶中，研钵用适量的0.1mol/L盐酸溶液分次洗净，洗液并入量瓶中，充分振摇使乌苯美司溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。在室温下放置，分别于0，1，2，4，6，8小时取样20ul，注入液相色谱仪，按照拟定方法测定，记录测定值，各时间段含量（%）分别为：99.1，98.9，99.2，99.0，99.3，98.7，含量均值（%）：99.1，RSD（%）：0.09。试验结果表明，该样品溶液在8小时内稳定性良好。
2.1.3.7 耐用性试验
取本品颗粒，分别用不同色谱柱，不同流动相比例，按照拟定方法测定，记录色谱图，色谱图中杂质峰应与主峰分离度良好，理论塔板数应符合要求。参照乌苯美司胶囊含量测定方法及中国药典乌苯美司胶囊含量均匀度方法，柱温均为40℃。结果显示流动相比例为甲醇：盐相（45：55），甲醇：盐相（39：61），甲醇：盐相（51：49），色谱柱为色谱柱：4.6*150mm Inertsil ODS-3，色谱柱4.6*150mmDiamonsil。含量均匀度的测定结果在98.7%-99.1%之间，RSD（%）：0.17。表明该法耐用性良好。
2.1.4 含量均匀度测定法.
根据上述方法学验证的结果，最终确定含量均匀度测定方法为： 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.6%磷酸二氢钠溶液（45∶55）为流动相；柱温为40℃；检测波长为254nm。理论板数按乌苯美司峰计算不低于3500。
测定法取本品1粒，置于研钵中研细，将细粉倾入25ml量瓶中，研钵用适量的0.1mol/L盐酸溶液分次洗净，洗液并入量瓶中，充分振摇使乌苯美司溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。精密量取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图。另取105℃干燥至恒重的乌苯美司对照品适量，精密称定，同法配制成每1ml约含1.2mg乌苯美司的溶液，作为对照品溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。
2.1.5 含量均匀度测定结果
按照确定的方法对130101、130102、130103三批次乌苯美司胶囊进行含量均匀度测定，每批10个样品。130101测定结果分别为（%）：97.9，98.0，98.9，99.1，99.5，97.6，97.5，97.8，99.9，100.3，A+1.80s=3.19；130102測定结果分别为（%）：99.9，98.3，99.6，98.3，100.0，98.5，98.7，100.6，98.0，100.0，A+1.80s=2.47；130103测定结果分别为（%）：98.5，99.9，98.0，98.1，100.2，98.2，99.8，100.5，99.6，98.7，A+1.80s=2.55；由试验结果可知，三批样品的含量均匀度均符合A+1.80s≤15.0的要求。
3 讨论
经过对乌苯美司胶囊含量均匀度测定方法从检测波长的选择，干扰试验，线性关系考查，重复性试验，回收率考查，溶液稳定性试验，耐用性试验等验证，证实该方法测定乌苯美司胶囊含量均匀度科学，准确，可用于产品的质量控制。同时和上市同类产品的质量对比研究显示了2产品质量基本一致。均符合药典规定的要求。
参考文献
[1] 《中国人民共和国药典》2010年版二部
[2] 吴金萍，朱晓燕，蔡旭萍.高效液相色谱法测定乌苯美司胶囊中乌苯美司含量[J].中国科技博览. 2010， （13）
[3] 王巍.乌苯美司胶囊含量测定方法方法学验证[J]《科协论坛（下半月刊）》.2013， （9）
[4] 刘仲义，黄萍.高效液相色谱法测定乌苯美司及其胶囊的含量[J]《药物分析杂志》 1993年第13卷第6期，396-399
作者简介：姚阳，1978.10.10，女，汉族，陕西西安人，陕西瑞盛生物科技有限公司，本科，执业药师