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以黄色短杆菌MH-1000为出发菌株,使用PCR技术克隆ilvBN与ilvC基因,对ilvBN进行定点突变,获得解除L-缬氨酸对乙酰羟酸合酶反馈抑制突变型基因ilvBN’.对基因ilvC进行点突变,获得乙酰羟酸变位酶突变基因ilvC’.通过重叠延伸PCR方法,将基因片段ilvBN’和ilvC’拼接为ilvBN’C’,进而连接至穿梭载体pXMJ19获得重组质粒pXMJ19-ilvBN’C’.该重组质粒转化至出发菌株获得工程菌株MH-1032.50 L分批补料发酵结果显示:MH-1000发酵72 h L-缬氨酸质量浓度为35.2 g/L,MH-1032发酵72 h L-缬氨酸质量浓度为38.4 g/L,增长9.1%,糖酸转化率从21.7%提高到25.8%.