论文部分内容阅读
目的
探讨大鼠胚胎肠神经干细胞(ENSCs)体外培养时间的选择。
方法在严格的条件控制下，从盛京医院SPF级动物实验室筛选的VSD大鼠的胎鼠和幼鼠作为研究对象，分别取孕16、18、20 d的胎鼠和生后1 d的幼鼠，每组各5只。以其肠管做原代培养，在碱性成纤维生长因子(bFGF)、N2添加剂和B27添加剂联合作用下使其稳定增殖，观察其神经球形成的时间及生长速度，并用10%的胎牛血清诱导其贴壁分化，应用SABC法免疫细胞化学染色检测巢蛋白(Nestin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、髓磷脂碱蛋白(MBP)和神经微丝200(NF-200)的表达，对ENSCs及其分化的细胞进行鉴定。
结果孕16 d和孕18 d提取的ENSCs于原代培养后第3天形成肠神经球，孕20 d和生后1 d提取的ENSCs于原代培养后第5天形成肠神经球。形成的神经球可以进行传代，鉴定为Nestin染色阳性细胞，并可诱导分化为神经元细胞(NF-200染色阳性细胞)、星形胶质细胞(GFAP染色阳性细胞)和少突胶质细胞(MBP染色阳性细胞)，说明所培养的细胞为肠神经干细胞。
结论采用无血清培养基加入特定生长因子的培养技术，可培养出在体外稳定增殖并有多向分化潜能的大鼠胚胎ENSCs；对于ENSCs体外培养取材时机，选择孕18 d大鼠胚胎为宜。