【摘 要】
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该文旨在探讨乙氧基血根碱（ethoxysanguinarine， Eth）对顺铂（cisplatin， DDP）耐药的人胃癌细胞的影响及其机制。选用SGC7901和DDP耐药的人胃癌细胞系SGC7901/DDP作为细胞模型;Western blot检测多药耐药相关蛋白在SGC7901和SGC7901/DDP细胞的表达水平；MTT实验检测DDP对SGC7901细胞和SGC7901/DDP细胞增殖的抑
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（82072928）； 湖北省自然科学基金创新群体项目（2021CFA009）； 十堰市科技局引导性项目（21Y08，21Y09）； 湖北医药学院研究生科技创新项目（YC2022032）； 2022年大学生创新创业训练计划项目（
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该文旨在探讨乙氧基血根碱（ethoxysanguinarine， Eth）对顺铂（cisplatin， DDP）耐药的人胃癌细胞的影响及其机制。选用SGC7901和DDP耐药的人胃癌细胞系SGC7901/DDP作为细胞模型;Western blot检测多药耐药相关蛋白在SGC7901和SGC7901/DDP细胞的表达水平；MTT实验检测DDP对SGC7901细胞和SGC7901/DDP细胞增殖的抑制作用；用增加浓度的Eth处理SGC7901和SGC7901/DDP细胞后，通过MTT实验检测Eth对SGC7901和SGC7901/DDP细胞增殖的影响；通过台盼蓝拒染实验、克隆形成实验和共聚焦高内涵成像分析系统检测Eth对SGC7901/DDP细胞增殖能力的影响；DAPI染色、Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测Eth对SGC7901/DDP细胞凋亡的影响；GFP-LC3转染实验检测Eth对SGC7901/DDP细胞自噬的影响；Western blot检测凋亡相关蛋白caspase-9、caspase-3和PARP的表达、自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达、多药耐药蛋白P-gp的表达、mTORC1下游关键效应子（mTOR、P70S6K、4E-BP1）的蛋白及磷酸化水平、CIP2A和Akt的蛋白及磷酸化水平；通过RT-qPCR分析Eth处理24 h后，SGC7901/DDP细胞中CIP2A的mRNA水平；在SGC7901/DDP细胞中，瞬时转染pcDNA3.1-HA-CIP2A，过表达CIP2A，并用Eth处理，通过MTT实验检测对SGC7901/DDP细胞增殖的影响，通过Western blot检测相关蛋白的表达变化；通过分子对接分析Eth与CIP2A的作用位点；进一步通过靶点稳定性药物亲和反应试验检测Eth与CIP2A的结合稳定性；SwissADME预测Eth的药代动力学性质和类药活性。结果表明SGC7901/DDP细胞对Eth的敏感性更高，Eth在低剂量下能够显著抑制SGC7901/DDP细胞的增殖及克隆形成，并改变SGC7901/DDP细胞的形态、圆度、面积。Eth处理组的细胞核明显皱缩，细胞凋亡率显著增加；Eth能下调caspase-9、caspase-3蛋白前体的表达，促进PARP切割，表明Eth诱导SGC7901/DDP细胞发生凋亡；Eth处理组细胞的GFP-LC3呈斑点化聚集；Eth能促进自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达上调，表明Eth活化SGC7901/DDP细胞自噬；Eth能抑制多药耐药相关蛋白P-gp的表达；Eth下调mTORC1下游关键效应子p-mTOR、p-P70S6K和p-4E-BP1的表达水平，降低CIP2A的表达水平及下游Akt的磷酸化水平并升高PP2A的活性且Eth对SGC7901/DDP细胞中CIP2A的表达水平无显著影响；过表达CIP2A能拮抗Eth处理对SGC7901/DDP细胞增殖的抑制和自噬的活化作用；分子对接模拟发现Eth与CIP2A具有结合作用；靶点稳定性药物亲和反应实验结果显示Eth与CIP2A存在直接结合；SwissADME模拟结果显示Eth具有潜在的类药活性。以上结果表明Eth通过下调CIP2A/PP2A/mTORC1信号通路，抑制SGC7901/DDP细胞增殖，诱导凋亡，活化自噬。该研究为治疗顺铂耐药的胃癌提供新型靶点。
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