【摘 要】
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通过分子结构、组织表达及启动子结构功能分析,探讨黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)溶酶体酸性脂肪酶(Lysosmal acid lipase,lal)基因的分子特征及转录调控,为lal在鱼类脂质代谢和转录水平的调控提供新的视野.实验采用RT-PCR和RACE克隆lal基因的cDNA全长序列,其长度为1802 bp,5′上游启动子长度为2052 bp,其中ORF长度为1197 bp,编码398个氨基酸,理论蛋白分子量大小为45.42 kD,等电点为7.70,含有23个残基的信号肽、5个
【机 构】
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华中农业大学水产学院,农业农村部淡水生物繁育重点实验室,武汉 430070
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通过分子结构、组织表达及启动子结构功能分析,探讨黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)溶酶体酸性脂肪酶(Lysosmal acid lipase,lal)基因的分子特征及转录调控,为lal在鱼类脂质代谢和转录水平的调控提供新的视野.实验采用RT-PCR和RACE克隆lal基因的cDNA全长序列,其长度为1802 bp,5′上游启动子长度为2052 bp,其中ORF长度为1197 bp,编码398个氨基酸,理论蛋白分子量大小为45.42 kD,等电点为7.70,含有23个残基的信号肽、5个糖基化位点(Asn35-Ile36-Ser37、Asn101-Thr102-Ser103、Asn273-Met274-Thr275、Asn320-Gln321-Ser322、Lys161-Thr162-Thr163)、3个半胱氨酸(Cys257、Cys265、Cys284)、催化三元体(Ser174、Asp344、His373)、一个“帽子”(Thr205-Val329)和一个“盖子”(Phe233-Leu272)结构域.氨基酸序列对比和系统发育树分析显示,黄颡鱼的lal与斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)亲缘关系最近.组织表达分析显示,lal基因的mRNA在脾脏、肠和精巢表达量最高.黄颡鱼lal启动子上存在Sp1、STAT3、PPARα、FOXO1、PPARγ及HNF4α等转录位点,启动子活性实验表明,–1507 bp/–1016 bp区域负调控启动子活性,–1016 bp/+51 bp区域正调控启动子活性.研究对黄颡鱼溶酶体酸性脂肪酶(lal)基因序列的分子特征进行了解析,有助于了解鱼类lal的结构和功能,为进一步研究鱼类脂质代谢的调控机制奠定基础.
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