【摘 要】
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由弧菌感染引起的疾病是影响鲍存活率的主要因素,实验以皱纹盘鲍为研究对象,探讨金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP)在皱纹盘鲍抗弧菌免疫中的功能及其与基质金属蛋白酶1 (matrix metalloproteinase 1,MMP-1)的相互作用关系.实验通过PCR技术克隆得到了TIMP cDNA序列,全长为2291 bp.利用NetNGlyc 1.0 Server和NetOGlyc 4.0 Server软件对TIMP的氨基酸序列进行分析
【机 构】
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集美大学海洋食品与生物工程学院,福建厦门361021;集美大学海洋食品与生物工程学院,福建厦门361021;水产品深加工技术国家地方联合工程研究中心,福建厦门361021
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由弧菌感染引起的疾病是影响鲍存活率的主要因素,实验以皱纹盘鲍为研究对象,探讨金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP)在皱纹盘鲍抗弧菌免疫中的功能及其与基质金属蛋白酶1 (matrix metalloproteinase 1,MMP-1)的相互作用关系.实验通过PCR技术克隆得到了TIMP cDNA序列,全长为2291 bp.利用NetNGlyc 1.0 Server和NetOGlyc 4.0 Server软件对TIMP的氨基酸序列进行分析,结果显示,TIMP有3个潜在的N-糖基化位点,分别位于第47、77和152位的Asn,以及一个潜在的O-糖基化位点,即位于第108位的Thr.多序列比对结果显示,皱纹盘鲍TIMP氨基酸序列与杂色鲍、太平洋牡蛎、泥蚶中TIMP的序列相似性分别为76.0％、18.9％和19.3％.利用荧光定量PCR技术分析了副溶血性弧菌感染过程中皱纹盘鲍不同组织中TIMP的表达情况,发现在弧菌感染早期,TIMP在血淋巴细胞和鳃组织中的表达量均显著上调.利用RNA干扰技术分别敲低皱纹盘鲍TIMP和MMP-1的表达水平,研究TIMP与MMP-1在皱纹盘鲍抗弧菌免疫中的相互作用关系.结果 显示,鲍体内MMP-1表达沉默后,TIMP表达量显著上调;而TIMP表达受到抑制时,MMP-l表达量显著下降,说明TIMP表达受MMP-1负调控,而MMP-1表达受TIMP正调控.本研究将有助于揭示TIMP及其与MMP-1相互作用在皱纹盘鲍先天免疫反应中的功能,也可为鲍养殖的病菌防治策略提供新的思路.
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