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目的
观察慢病毒介导miRNA-184体外转染对TGF-β2诱导人LEC发生上皮间质转分化(EMT)时其基因表型的影响。
方法实验研究。构建pL/IRES/GFP-miR-184质粒,经慢病毒介导体外转染由TGF-β2诱导而发生EMT的人LEC,利用QRT-PCR检测转染0、6、24 h后人LEC中相关基因E-钙黏蛋白(CDH1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(VIM)表达水平的变化,并与阴性对照慢病毒侵染组进行比较。采用单因素方差分析进行统计学分析。
结果成功构建pL/IRES/GFP-miR-184质粒,经慢病毒介导转染由TGF-β2诱导而发生EMT的人LEC 24 h后,上皮细胞标志性基因CDH1相对表达量保持相对不变,24 h时为6.30E-06,而对照组则下调,24 h时为1.37E-06,差异有统计学意义(F=261.78,P<0.01);间质细胞标志性基因α-SMA和VIM的相对表达量均保持相对不变,24 h时分别为1.55E-02和4.61E-04,而对照组则均上调,24 h时分别为2.09E-02和6.73E-04,差异有统计学意义(F=26.21,P=0.007;F=17.91,P=0.013)。
结论miRNA-184经慢病毒介导转染人LEC后,能抑制其由TGF-β2诱导所发生的EMT相关的基因表型变化。(中华眼科杂志,2015,51:295-300)