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目的:构建miR-20a基因的miRNA Sponge载体,建立Jurkat-S稳定细胞株,为进一步研究miR-20a功能及应用干扰技术治疗奠定基础;检测急性白血病患者中miR-17、miR-20a前体的表达情况并探讨miRNA Sponge介导的miR-17、miR-20a沉默的抗白血病作用机制。方法:设计、合成一对含有2个重复针对miR-20a成熟序列第9-12碱基错配的序列,并带有酶切位点,退火后连接到pCDNA3.0-L表达载体上;载体双酶切后再与退火产物连接,重复4次,酶切及荧光素酶活性鉴定;亚克隆到慢病毒表达载体,与psPAX2、PMD2G共转染HEK293T细胞,包装产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度,感染高表达miR-17、miR-20a的Jurkat细胞株;应用real-time PCR和Western blot技术分别检测Jurkat-S稳定细胞中P21及E2F1mRNA和蛋白水平的表达,并与对照组进行比较;CCK-8方法及流式细胞仪方法分别检测miR-17、miR-20a沉默对Jurkat细胞增殖能力及细胞周期的影响。采用real-timePCR方法检测初治急性白血病患者及白血病细胞株中miR-17、miR-20a前体的表达水平,分析其在各型白血病中的表达情况。结果:成功构建针对miR-20a基因的Sponge载体,病毒滴度为5×107TU/ml;建立稳定转染的Jurkat-S细胞株,有效干扰验证显示miR-20a Sponge能明显上调P21及E2F1的mRNA及蛋白水平,差异有统计学意义(p<0.05);初治急性白血病患者中miR-17、miR-20a前体的表达明显高于正常对照(p<0.05);且与急性髓系白血病患者相比,急性淋巴细胞白血病患者中的表达量更高;然而二者表达量与患者外周血白细胞水平无明显相关性(p>0.05);miR-17、miR-20a沉默能抑制Jurkat细胞的增殖,且导致细胞周期阻滞于G1-S期。结论:成功构建miR-20a基因的miRNA Sponge载体,建立稳定干扰miR-20a表达的Jurkat-S细胞株。急性白血病患者中miR-17、miR-20a呈过表达,可能参与白血病的发生、发展;高表达的miR-17、miR-20a可通过在转录后抑制P21、E2F1表达,从而促进细胞增殖及细胞周期G1-S期转换。