【摘 要】
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目的构建人SORBS1真核表达载体并检测在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法以GST-hSORBS1为模板,利用PCR扩增hSORBS1基因cDNA全长,并将其克隆至3*Flag标签的真核表达载体中。进
【机 构】
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中国医科大学附属盛京医院骨科,中国医科大学附属口腔医院口腔颌面外科教研室口腔颌面头颈外科,中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点实验室,
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目的构建人SORBS1真核表达载体并检测在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法以GST-hSORBS1为模板,利用PCR扩增hSORBS1基因cDNA全长,并将其克隆至3*Flag标签的真核表达载体中。进一步将构建的重组载体进行酶切和测序鉴定,并转染到骨肉瘤细胞MG-63中,提取蛋白进行Western blot检测。同时利用共聚焦激光显微镜观察3*Flag-hSORBS1在MG-63细胞中的定位,使用免疫沉淀的方法纯化hSORBS1蛋白。结果hSORBS1基因cDNA全长成功构建到真核表达载体3*Flag中,Western blot检测到3*Flag-hSORBS1融合蛋白表达,且在骨肉瘤细胞MG-63中主要定位于细胞周边,并成功纯化hSORBS1蛋白。结论成功构建3*Flag-hSORBS1真核表达质粒,同时鉴定其融合蛋白的表达,并纯化hSORBS1蛋白。3*Flag-hSORBS1蛋白主要定位在细胞周边。
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