金针菇多糖提取纯化及生物活性研究

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金针菇(Flammulina Velutipes)作为一种珍贵食用真菌,由于对其研究还很少,因此具有重要的开发价值。本研究选择金针菇子实体,对其提取分离纯化工艺进行研究,并初步探讨其在抗氧化、降血脂等方面的生物活性,为金针菇多糖作为药物提供实验依据。本实验研究结果如下:1、建立蒽酮-硫酸法测定金针菇多糖含量通过对蒽酮-硫酸法显色体系稳定性、重现性和回收率实验,得出蒽酮-硫酸法测定金针菇多糖比较理想。2、热水浸提工艺优化确定最佳工艺条件为:提取温度90℃、浸提时间4h、料液比1:30、pH=7、浸提次数2次。3、酶解结合热水浸提法提取工艺研究确定酶解结合热水浸提法的最佳工艺条件为:固液比1:5,加酶量1%,温度为50℃,pH值为4.5,时间为80min。酶解后热水浸提温度确定为80℃,固液比为1:20,时间为80min,提取次数为1次。4、乙醇沉淀工艺研究乙醇浓度为60%~70%时,多糖醇析效果最佳,沉淀率达到82.1%。5、除蛋白质工艺研究木瓜蛋白酶结合Sevag法除蛋白质。样品与氯仿-正丁醇溶液之比为1:0.24,加酶量为0.1%时,多糖的得率和蛋白质清除率较高。6、活性炭脱色工艺研究确定1%的活性炭,在20℃左右,脱色时间控制在40min以内效果最佳。7、金针菇多糖的DEAE-Sephadex A-25柱层析分离选用AB-8型大孔吸附树脂对金针菇多糖进行纯化,取纯化金针菇多糖上DEAE-Sephadex A-25柱,蒸馏水洗脱得一种中性多糖FVP1,0.2mol/L和0.5mol/LFVP溶液分别洗脱得两种不同的酸性多糖FVP2和FVP3。8、金针菇多糖的单糖组分研究采用气相色谱法测定FVP2的单糖组分,主要是由D-甘露糖、D-半乳糖、D-葡萄糖、D-岩藻糖、L-鼠李糖五种单糖组分组成。9、金针菇多糖的生物活性研究对金针菇多糖在抗氧化和降血脂等生物活性进行测试,结果显示金针菇多糖表现出一定的生物活性。
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