目的 探讨RhoA-Rock信号通路在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)转分化中的作用.方法 体外培养SD大鼠原代腹膜间皮细胞,静止24 h后,采用随机数字表法随机分为以下4组:正常对照组、TGF-β1(10μg/L)刺激组、TGF-β(10μg/L)+Y-27632(Rock特异性抑制剂,10 μmol/L)组(Y-27632预处理2 h)、Y-27632(10 μmol/L)组.用TGF-β1(10 μg/L)刺激RPMC不同时间,观察α平滑肌肌动蛋白(α-SMA),E钙黏素(E-cadhetin)、Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)的表达.RT-PCR法检测E-cadherin、α-SMA和Col Ⅰ mRNA表达.Western印迹法检测RhoA(包括总RhoA及活化的RhoA)、E-cadhefin、α-SMA、Col Ⅰ和波形蛋白(vimentin)表达.活化的RhoA由膜蛋白提取试剂盒提取.结果 (1)TGF-β1(10 μg/L)刺激RPMC能诱导RhoA活化,于10 min开始出现活性升高,为对照组的(2.57±0.52)倍(P<0.05);1 h达高峰,为对照组的(4.35±0.41)倍(P<0.05).(2)TGF-β1(10 μg/L)刺激RPMC能导致E-cadherin mRNA和蛋白表达下调,α-SMA、Col Ⅰ mRNA和蛋白表达上调,呈时间依赖性.(3)Rock特异性抑制剂Y-27632能显著下调α-SMA、Col Ⅰ mRNA的表达,较TGF-β1刺激组各降低了53.8%和55.7%(均P<0.05),并且能下调α-SMA、Col Ⅰ和vimentin蛋白的表达,较TGF-β1刺激组分别降低了42.6%、60.1%和58.1%(均P<0.05),但不能上调E-cadherinmRNA和蛋白的表达.结论 TGF-β1可通过RhoA-Rock信号通路介导大鼠腹膜间皮细胞转分化,抑制该通路可作为防治腹膜纤维化的潜在靶点。
RhoA-Rock信号通路在转化生长因子β1诱导大鼠腹膜间皮细胞转分化中的作用
【摘 要】
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目的 探讨RhoA-Rock信号通路在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)转分化中的作用.方法 体外培养SD大鼠原代腹膜间皮细胞,静止24 h后,采用随机数字表法随机分为以下4组:正常对照组、TGF-β1(10μg/L)刺激组、TGF-β(10μg/L)+Y-27632(Rock特异性抑制剂,10 μmol/L)组(Y-27632预处理2 h)、Y-27632(10 μ
【机 构】
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410013,长沙,中南大学湘雅三医院肾内科,杭州市红十字会医院肾内科,中山大学附属第一医院肾内科,中山大学附属第一医院肾内科
【出 处】
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中华肾脏病杂志
【发表日期】
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2009年25期
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