【摘 要】
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目的:体外诱导扩增获取大量高纯度小鼠骨髓来源树突状细胞(dendritic cells,DC),并研究DC不同生长状态、不同培养时间的生物学特性差异.方法:重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激
【机 构】
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武汉市第一医院皮肤科,武汉430022;华中科技大学同济医学院,武汉430022
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目的:体外诱导扩增获取大量高纯度小鼠骨髓来源树突状细胞(dendritic cells,DC),并研究DC不同生长状态、不同培养时间的生物学特性差异.方法:重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(recombinant-murine granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,rmGM-CSF)体外诱导小鼠骨髓细胞分化为DC,在培养接种后0h及1 d、4 d、7 d、9 d、11 d用倒置光学显微镜动态观察DC的数量、存活率及形态学变化.分别收集9d不加入重组小鼠白细胞介素-4(recombinant mouse interleukin-4,rmIL-4)及加入rmIL-4刺激的悬浮细胞和贴壁细胞,流式细胞术(flow cytometry,FACS)检测悬浮细胞和贴壁细胞表面分子CD11c、CD80、CD86、MHC-Ⅱ的表达水平.收集培养9 d、11 d的DC,利用FACS分析BMDC细胞CD11c表达水平.采用SPSS 17.0软件进行统计学分析,两独立样本间的比较采用t.检验.结果:培养0h及1 d、4 d、7 d、9 d、11 d的BMDC成活率均为90％～95％.培养4 d,大量集落细胞团形成并逐渐增多.培养9 d,细胞明显变大,表面可见明显不规则树突或伪足.培养9 d,流式细胞术显示悬浮细胞表面标志CD11C+CD80+、CD11C+CD86、CD11C+MHC-Ⅱ的表达比例分别为(88.10±2.41)％、(84.60±3.26)％、(92.90±3.93)％,高于贴壁细胞的(79.17±2.32)％、(75.40±4.41)％、(82.77±4.80)％,差异有统计学意义(P＜0.05).加人rrnJL-4刺激与不加入rmIL-4 BMDC中CD11c+表达差异无统计学意义(P＞0.05).培养11 d,悬浮细胞及贴壁细胞的CD11c+表达明显高于培养9d的表达(P＜0.05).结论:体外简易诱导培养可以获得高纯度小鼠骨髓来源的各具特性DC;rmGM-CSF单独或者联合rmIL-4诱导刺激对DC特异表面标志物CD11c+无明显影响;悬浮细胞的成熟度高于贴壁细胞;延长培养时间可提高CD11c+DC的产量及纯度.
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