【摘 要】
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以玉米内州萎蔫病菌单抗(4H4和4G12)为基础,纯化抗体后,进行亚类鉴定、效价及特异性测定。比较间接ELISA和双单抗夹心ELISA(DAS-ELISA)的检测灵敏度,并应用于玉米种子中萎蔫
【机 构】
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河北农业大学植物保护学院,中国检科院综合检测中心,河北大学,
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以玉米内州萎蔫病菌单抗(4H4和4G12)为基础,纯化抗体后,进行亚类鉴定、效价及特异性测定。比较间接ELISA和双单抗夹心ELISA(DAS-ELISA)的检测灵敏度,并应用于玉米种子中萎蔫病菌的检测。结果表明,两株单克隆抗体(0.4g/L)效价均可达1:256000,亚类鉴定结果分别为IgG2a和IgG2b,轻链均为K链。与供试的16株非目标细菌均无交叉反应。DAS-ELISA对萎蔫病菌种子悬浮液的检测灵敏度为1.0×109CFU/L,在此基础上建立了灵敏、特异的玉米内州萎蔫病菌双单抗DAS-ELISA检测方法。
Based on the maize internal wilt disease monoclonal antibodies (4H4 and 4G12), the antibodies were purified and subclassificated, titrated and assayed. The detection sensitivity of indirect ELISA and double-antibody sandwich ELISA (DAS-ELISA) was compared and applied to the detection of wilt disease in maize seeds. The results showed that the titer of two monoclonal antibodies (0.4g / L) reached 1: 256000, the subclass identification results were IgG2a and IgG2b, and the light chains were K chain. There was no cross-reaction with 16 non-target bacteria tested. The detection sensitivity of DAS-ELISA to the wilt disease germ suspension was 1.0 × 109 CFU / L. On this basis, a sensitive and specific DAS-ELISA method was established for the detection of wilt pathogen in maize.
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