【摘 要】
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目的 探讨LINC00467调控miR-363促进胶质瘤(GBM)替莫唑胺(TMZ)耐药的作用机制.方法 亲本GBM细胞系 A172和 U373构建TMZ抗性细胞株 A172TR 和 U373TR,通过 CCK-8、Western Blot 以及 AnnexinV-FITC/PI法验证耐TMZ细胞模型.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LINC00467在亲本细胞与耐TMZ细胞中水平,通过siRNA干扰LINC00467表达后,CCK-8、qRT-PCR以及AnnexinV-FITC/PI法检测干扰
【机 构】
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濮阳市安阳地区医院神经外二科,河南安阳455000;河南省安阳市肿瘤医院内科,河南安阳455000
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目的 探讨LINC00467调控miR-363促进胶质瘤(GBM)替莫唑胺(TMZ)耐药的作用机制.方法 亲本GBM细胞系 A172和 U373构建TMZ抗性细胞株 A172TR 和 U373TR,通过 CCK-8、Western Blot 以及 AnnexinV-FITC/PI法验证耐TMZ细胞模型.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LINC00467在亲本细胞与耐TMZ细胞中水平,通过siRNA干扰LINC00467表达后,CCK-8、qRT-PCR以及AnnexinV-FITC/PI法检测干扰LINC00467表达对耐TMZ细胞的影响.双荧光素酶实验验证miR-363与LINC00467的关系.qRT-PCR检测miR-363在GBM细胞以及沉默LINC00467后耐TMZ细胞中水平.结果 与亲本细胞相比,耐TMZ细胞株A172TR和U373TR增殖能力明显上调(P＜0.05),ABC超家族ABCB1、ABCC1、ABCG2及MGMT的蛋白表达量显著上调(P＜0.05),细胞凋亡率明显降低(P＜0.05).与亲本细胞相比,LINC00467在耐TMZ细胞A172TR和U373TR中表达显著上调,且在耐TMZ细胞中下调LINC00467表达可明显降低其增殖活力,提高其凋亡率(P＜0.05).miR-363在耐TMZ细胞中的表达显著低于亲本细胞,且在耐TMZ细胞中下调LINC00467表达后,miR-363的表达增高(P＜0.05).经验证,miR-363与LINC00467存在调控关系.结论 LINC00467可能通过负向调控miR-363进而参与调控GBM细胞增殖及凋亡等过程,从而促进GBM TMZ 耐药.
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