【摘 要】
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采用单因素和正交试验对红毛丹ISSR-PCR反应体系中的各组分(DNA、引物、Mg~(2+)、dNTPs和Taq DNA聚合酶)进行了优化比较,确定了最佳的20μL反应体系包括DNA模板30ng、dNTPs 0
【机 构】
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中国热带农业科学院海口实验站,中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所,海南省保亭黎族苗族自治县国营农场管理局,
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采用单因素和正交试验对红毛丹ISSR-PCR反应体系中的各组分(DNA、引物、Mg~(2+)、dNTPs和Taq DNA聚合酶)进行了优化比较,确定了最佳的20μL反应体系包括DNA模板30ng、dNTPs 0.1mmol/L、引物0.2μmol/L、Taq DNA聚合酶1.0U、Mg~(2+)2.0mmol/L;进一步利用该体系从20条ISSR引物中筛选出扩增条带清晰、多态性好的引物9条,从3个红毛丹品系中共扩增出多态性条带204条,多态条带比例达76%。
The components (DNA, primer, Mg 2+, dNTPs and Taq DNA polymerase) in ISSR-PCR reaction system were optimized by single factor and orthogonal test to determine the best 20μL reaction system includes 30ng of DNA template, 0.1mmol / L of dNTPs, 0.2μmol / L of primer, 1.0U of Taq DNA polymerase and 2.0mmol / L of Mg 2+. The system further screened out 20 ISSR primers A total of 9 polymorphic bands were amplified from 3 rambutan lines with 9 clear primers and 9 polymorphic bands. The percentage of polymorphic bands was 76%.
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