【摘 要】
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目的 探讨缺氧对PC12细胞中肌细胞增强因子2A(MEF2A)蛋白表达的影响及其小干扰RNA(siRNA)的抑制作用.方法 常规培养或缺氧培养PC12细胞.设立正常对照组(用含100 g/L胎牛血清
【机 构】
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泰州市人民医院,儿科,江苏,泰州,225300南京医科大学第一附属医院,儿科,南京,210029;
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目的 探讨缺氧对PC12细胞中肌细胞增强因子2A(MEF2A)蛋白表达的影响及其小干扰RNA(siRNA)的抑制作用.方法 常规培养或缺氧培养PC12细胞.设立正常对照组(用含100 g/L胎牛血清的完全培养液常规培养PC12细胞)、缺氧组(用含100 g/L胎牛血清的完全培养液常规培养后,再缺氧培养1 h)、MEF2A-siRNA加缺氧组(靶向抑制MEF2A基因的真核表达载体转染后,再缺氧培养1 h),并设非基因抑制的siRNA对照组(非基因抑制的真核表达载体0转染后,再缺氧培养1 h).设计合成和筛选针对MEF2A-siRNA序列,构建真核细胞表达载体,用脂质体介导转染PCI2细胞.实时荧光定量PCR法检测MEF2A的mRNA表达水平.Western blot检测MEF2A和突触蛋白Synapsin-1的蛋白表达量.结果 在用含有MEF2A基因的靶向抑制序列MEF2A-siRNA转染后PC12细胞中MEF2A mRNA相对表达量(2-ΔΔCT)为0.12±0.03,显著低于常规培养的PC12细胞中的表达量(1.01±0.02),抑制率为88.1%(q=9.123 P<0.01).缺氧组MEF2A蛋白表达量为98.4±11.7,显著高于正常对照组(47.5±7.6,q=8.82P<0.01).而缺氧组中突触蛋白Synapsin-1的蛋白表达量为39.7±4.6,显著低于正常对照组(123.3±23.9,q=11.21 P<0.01).与缺氧组比较,MEF2A-siRNA加缺氧组中MEF2A蛋白量显著下调(q=7.49 P<0.01),Synapsin-l蛋白量显著上调(q=9.55P<0.01).结论缺氧诱导PC12细胞中MEF2A的表达升高和突触蛋白synapsin-1表达下调,siRNA转染可靶向抑制MEF2A基因表达,并对缺氧诱导的PC12细胞中Synapsin-1蛋白表达下调也有抑制作用.
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