【摘 要】
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本研究旨在建立一种快速、灵敏的用于诊断水泡性口炎的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法。通过RT-PCR分别扩增印第安纳型水泡性口炎病毒（VSV-IN）和新泽西型水泡性口炎病毒（VSVNJ）的G基因，然后将其连接到克隆载体pMD19-T上，构建质粒标准品pMD-VSV-IN-G和pMD-VSV-NJG。根据GenBank中VSV-IN和VSV-NJ的G基因保守序列设计引物，利用S
【机 构】
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中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农村农业部兽用药物与诊断技术北京科学观测试验站
【基金项目】
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“十三五”国家重点研发计划项目（2016YFD0501102）； 国家自然科学基金面上项目（31472203）； 广东省“银龄专项”（2020A1313030136）；
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本研究旨在建立一种快速、灵敏的用于诊断水泡性口炎的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法。通过RT-PCR分别扩增印第安纳型水泡性口炎病毒（VSV-IN）和新泽西型水泡性口炎病毒（VSVNJ）的G基因，然后将其连接到克隆载体pMD19-T上，构建质粒标准品pMD-VSV-IN-G和pMD-VSV-NJG。根据GenBank中VSV-IN和VSV-NJ的G基因保守序列设计引物，利用SYBR GreenⅠ法进行实时荧光定量RT-PCR，建立标准曲线，并进行特异性、敏感性和重复性试验。结果，在拷贝数6.82～6.82×10~8copies/μL范围内，Ct值与质粒拷贝数的对数值呈良好的线性关系，pMD-VSV-IN-G标准曲线的R~2值为0.998 12,p MD-VSV-NJ-G标准曲线的R~2值为0.997 48；检测其他病毒均无特异性扩增曲线，特异性良好。pMD-VSVIN-G的检测灵敏度为6.82 copies/μL,pMD-VSV-NJ-G的检测灵敏度也为6.82 copies/μL，是普通RTPCR方法的10倍。用该方法对实验室保存的VSV-IN和VSV-NJ各5份攻毒小鼠样品进行检测，检测结果与普通RT-PCR检测一致。上述结果表明，本检测方法的建立对快速、灵敏鉴别诊断IN型和NJ型水泡性口炎病毒具有重要的应用价值。
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