【摘 要】
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目的 建立基于环介导等温扩增(LAMP)技术的肠出血性大肠埃希菌(EHEC) O157:H7快速简便检测方法,并与PCR进行比较.方法 针对EHEC O157:H7保守的rfbE基因序列,设计特异性引物,
【机 构】
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南方医科大学公共卫生与热带医学学院,广东广州,510515南方医科大学公共卫生与热带医学学院,广东广州510515 ;中国人民解放军第181医院检验科,广西桂林541002;
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目的 建立基于环介导等温扩增(LAMP)技术的肠出血性大肠埃希菌(EHEC) O157:H7快速简便检测方法,并与PCR进行比较.方法 针对EHEC O157:H7保守的rfbE基因序列,设计特异性引物,建立LAMP和PCR榆测技术并优化其反应条件,比较这两种检测方法的灵敏度、特异性和对实际样品的检测结果.结果 成功建立了LAMP和PCR榆测体系,灵敏度检测结果显示,LAMP检测限低至10 cfi/ml,PCR检测限为102 cfu/ml,LAMP检测灵敏度高于PCR;对39株近源菌进行检测,结果显示,LAMP法仅7株EHEC O157:H7得到阳性结果,非EHEC O157:H7菌株均为阴性,PCR产物则出现非特异性条带,LAMP法特异性比PCR法高.对于32份猪肉样品的检测,LAMP和PCR与常规检测结果一致,3份样品检测阳性.结论 LAMP检测技术的特异性和灵敏度较PCR高,并且操作简便、检测成本低,耗时短,更有望发展成为快速准确检测EHEC O157:H7的有效手段.
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