【摘 要】
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目的通过遗传工程获得ＺＰ３α融合蛋白，以便用表达产物制备ＺＰ３α单克隆抗体。方法根据重新测序的猪ＺＰ３αｃＤＮＡ５＇端非编码碱基数，ｐＷＲ４５０表达质粒家族的ｐＷＲ４５０－２被选用来表达β－半乳糖苷酶（ＬａｃＺ）／ＺＰ３α融合蛋白。带５＇端非编码区
【机 构】
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上海市计划生育科学研究所,复旦大学
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目的通过遗传工程获得ＺＰ３α融合蛋白，以便用表达产物制备ＺＰ３α单克隆抗体。方法根据重新测序的猪ＺＰ３αｃＤＮＡ５＇端非编码碱基数，ｐＷＲ４５０表达质粒家族的ｐＷＲ４５０－２被选用来表达β－半乳糖苷酶（ＬａｃＺ）／ＺＰ３α融合蛋白。带５＇端非编码区和信号顺序的全长ＺＰ３αｃＤＮＡ片段，用ＥｃｏＲⅠ酶切自ｐＺ５８质粒，然后被重组插入ｐＷＲ４５０－２质粒中被截短ＬａｃＺ＇基因的３＇端多克隆区。此重组质粒转化大肠杆菌ＴＧ１后，ＺＰ３α融合蛋白的表达通过ＩＰＴＧ诱导。结果在１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ存在下可观察到ＬａｃＺ／ＺＰ３α融合蛋白在大肠杆菌中的表达，表达量约占总细菌蛋白的５％。在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上，融合蛋白显示相对分子质量为１０．２×１０４。在蛋白印迹实验中，融合蛋白显示了与兔抗猪ＺＰＩｇＧ的特异免疫学反应。结论猪ＺＰ３α融合蛋白的可获得性将有助于今后开展制备抗ＺＰ３α单抗和评价它的抗生育功效等研究
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