蛋白免疫印迹法在G蛋白检测中的应用

来源 :第三军医大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:blaze1982
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目的:建立一项用蛋白免疫印迹法测定鸟苷酸结合蛋白(G蛋白)含量的技术。方法:取冷冻组织块200mg置于4℃预冷的匀浆缓冲液中匀浆、离心后,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,电转移法转移至硝酸纤维素膜上,经5%脱脂奶粉封闭后,依序与抗G蛋白抗体和辣根过氧化物酶标记的IgG反应,化学发光法检测。结果:所得的G蛋白目标带清晰、明显,重复性好。不同种属大鼠主动脉、心房、心室、脑组织中Goα和Giα均为单一带,Fischer344大鼠Gsα主动脉为4条带,Sprague-Dawley和WKY/SHR大鼠主动脉Gsα为3条带,心房和心室Gsα为3条带,Fischer344和Wistar大鼠脑组织中Gsα只有两条带。Wistar大鼠肺组织浆和膜中Gqα、Giα均为单一带,Gsα两条带;肺组织膜中Goα为单一带,肺组织浆中未能检出Goα。结论:用Westernblot技术可较好地检测G蛋白含量和带型分布。不同种属动物及组织G蛋白亚型的含量和带型分布是不完全相同的。
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