诱导pIRES-Egr1-EGFP-Omi/HtrA2的表达对人眼脉络膜黑色素瘤细胞OCM-1凋亡的影响

来源 :中华实验外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:leeyongfan
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目的 诱导pIRES-Egr1-EGFP-Omi/HtrA2质粒在人眼脉络膜黑色素瘤细胞OCM-1的表达,观察其对OCM-1细胞凋亡的影响.方法 设计合成pIRES-Egr1-EGFP及pIRES-Egr1-EGFP-Omi/HtrA2质粒,用LipofectamineTM2000脂质体法分别转染入OCM-1细胞,50 μmol/L双氧水干预转染细胞后,荧光显微镜观察两组细胞转染表达效率.Western blot检测质粒表达后Omi/HtrA2以及X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的蛋白,流式细胞仪和噻唑蓝(MTT)法检测细胞捌亡.结果 构建的两组质粒分别转染入OCM-1细胞,转染pIRES-Egr1-EGFP组和pIRES-Egr1-EGFP-Omi/HtrA2组细胞在双氧水干预后表达绿色荧光细胞数均较干预前增加(P<0.05),分别为78.9±7.8和80.3±3.2 pIRES-Egr1-EGFP-Omi/HtrA2组细胞在双氧水干预后,Omi/HtrA2和XIAP蛋白的表达分别较诱导前增加53.5%和降低31.9%,差异有统计学意义(P<0.01);细胞凋亡率显著增加,细胞凋亡数增加到[(8.19±2 13)%,P<0.01].结论 双氧水能有效的启动pIRES-Egr1-EGFP-Omi/HtrA2质粒并诱导其下游的基因表达,引起细胞的凋亡增加,其机制与Omi/HtrA2以及XIAP蛋白表达变化相关。

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