利用Cas9 RNP技术制备B2M和PD-1高效率双基因敲除的人原代T淋巴细胞

来源 :肿瘤防治研究 | 被引量 : 0次 | 上传用户：liongliong449

【摘要】

：

目的观察Cas9 RNP技术制备B2M和PD-1双基因敲除的人原代T淋巴细胞(以下简称T细胞)的效率。方法设计单向导RNA(sgRNA)后克隆至载体质粒,经转染HEK293T细胞后筛选出高效率的sgR

【作者】

：

徐娅付烊朱诗聪章必成

【机构】

：

武汉科技大学医学院,湖北中医药大学附属襄阳医院肿瘤科,武汉大学人民医院肿瘤中心

【出处】

：

肿瘤防治研究

【发表日期】

：

2020年6期

【关键词】

：

Cas9 核糖核蛋白 PD-1 Β2-微球蛋白 T淋巴细胞 Cas9RibonucleoproteinsPD-1Beta-2 microglobulinT ly

【基金项目】

：

湖北省自然科学基金(2019CFB635),湖北省卫健委科研课题(WJ2019M194),希思科-恒瑞肿瘤研究基金(Y-HR2018-328),希思科-BMS肿瘤免疫治疗研究基金(Y-BMS2019-003)

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目的观察Cas9 RNP技术制备B2M和PD-1双基因敲除的人原代T淋巴细胞(以下简称T细胞)的效率。方法设计单向导RNA(sgRNA)后克隆至载体质粒,经转染HEK293T细胞后筛选出高效率的sgRNA;先后构建B2M及PD-1单基因敲除及同时敲除双基因的T细胞,分别通过Sanger测序、TA克隆及流式细胞术等方法验证编辑效率。结果成功构建包含sgRNA的载体质粒并经初筛获得高效率的B2M sgRNA1及PD-1 sgRNA1;在T细胞中验证B2M和PD-1单基因敲除效率均高达90%;构建双基因敲除T细

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