【摘 要】
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目的 探讨胸苷激酶-1(TK1)对前列腺癌PC3细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测TK1 mRNA和蛋白在人正常前列腺上皮细胞和前列腺癌PC3细胞中的表达;利用脂质体转染PC3细胞,根据转染情况将实验分为对照组(未转染siRNA)、NC siRNA(转染阴性siRNA)组和TK1 siRNA组(转染TK1 siRNA).转染48 h后,通过MTT细胞增殖实验、克隆形成实验和侵袭实验检测各组PC3细胞的存活能力、增殖活性和侵袭活性.结果 人正常前列腺上皮细胞RWPE-1和前
【机 构】
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武汉市第一医院泌尿外科,湖北 武汉 430022;华中科技大学附属协和医院泌尿外科,湖北 武汉 430022
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目的 探讨胸苷激酶-1(TK1)对前列腺癌PC3细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测TK1 mRNA和蛋白在人正常前列腺上皮细胞和前列腺癌PC3细胞中的表达;利用脂质体转染PC3细胞,根据转染情况将实验分为对照组(未转染siRNA)、NC siRNA(转染阴性siRNA)组和TK1 siRNA组(转染TK1 siRNA).转染48 h后,通过MTT细胞增殖实验、克隆形成实验和侵袭实验检测各组PC3细胞的存活能力、增殖活性和侵袭活性.结果 人正常前列腺上皮细胞RWPE-1和前列腺癌PC3细胞中TK1 mRNA相对表达水平分别为1.000±0.022和6.512±0.708,组间均值差异有统计学意义,t=13.612,P=0.005;TK1蛋白相对表达水平分别为1.000±0.031和3.508±0.583,组间均值差异有统计学意义,t=20.663,P=0.002.PC3细胞转染NC siRNA和TK1 siRNA 48 h后,TK1 mRNA在对照组中的相对表达量为1.000±0.013,NC siRNA组为1.023±0.018,TK1 siRNA组为0.142±0.050,3组比较差异有统计学意义,F=44.27,P<0.001.其中,TK1 siRNA组TK1 mRNA表达量显著低于对照组(t=14.625,P=0.005)和NC siRNA组(t=13.374,P=0.006),差异有统计学意义.TK1蛋白在对照组中的相对表达量为1.000±0.041,NC siRNA组为1.018±0.052,TK1 siRNA组为0.250±0.062,3组比较差异有统计学意义,F=42.52,P<0.001.其中,TK1 siRNA组TK1蛋白表达量显著低于对照组(t=21.330,P=0.002)和NC siRNA组(t=16.426,P=0.004),差异有统计学意义.MTT结果显示,TK1 siRNA组PC3细胞的存活能力降低,与NC siRNA组比较差异有统计学意义,并呈时间依赖,F组别=68.37,F时间=114.88,F组别×时间=43.62,均P<0.001.克隆形成实验结果显示,NC siRNA组和TK1 siRNA组克隆细胞集落数分别为32.25±5.82和8.64±1.50,2组比较差异有统计学意义,t=32.181,P=0.001.细胞侵袭实验结果显示,NC siRNA组和TK1 siRNA组的侵袭细胞数分别为158.35±18.62和60.52±7.33,2组比较差异有统计学意义,t=28.742,P=0.001.结论 TK1 mRNA和蛋白在前列腺癌PC3细胞中呈高表达水平,沉默TK1表达能够显著抑制PC3细胞的增殖和侵袭能力.
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