论文部分内容阅读
【关键词】乙肝表面抗原（HBSAg）； 室内质控
乙肝病毒（HBV）的慢性携带者约占我国人群的10%～20%。乙肝病毒可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，部分患者可转为肝硬化甚至肝细胞癌（HCC），已成为严重的社会和公共卫生问题。乙型病毒性肝炎是我国发病率最高的疾病之一，而我省属于西部偏远地区，乙肝发病率也呈逐年上升趋势，而且高于全国平均水平。目前国内基本上采用ELISA法检测乙肝病毒表面抗原（HBsAg），但由于缺乏统一标准，国内目前并没有对免疫室内质控标准品—HBsAg的推广及普及，其临床诊断主要依赖临床检验，而检验结果的准确性取决于试剂质量和操作等因素，在实际操作中发现不同厂家生产的HBsAg试剂盒敏感性有差别，因而采用不同试剂检测得到的定性结果有较大差别，因此建立室内质控非常重要[1，2] 。商品性质控价格昂贵，运输不当造成质控效价降低，即州县级医院选择自制临界值质控大大降低了假阳性和假阴性结果的发生率，以适应日常检验工作[3]。
材料与方法
1.材料
1.1血清制备 收集临床及检验确诊为乙型病毒性肝炎患者血清，经检测为表面抗原阳性，无脂血、溶血、黄疸现象，清晰透明血清5ml。收集临床及检验结果为表面抗原阴性，无脂血、溶血、黄疸现象，清晰透明血清30ml。
1.2仪器 北京康彻思坦表面抗原临界值血清，批号为201208002，含量0.5IU/ml ；上海科华生物工程股份有限公司乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法），批号为201208052； Thermo Multiskan MK3酶标仪； Thermo DNα-9620A洗板机； 隔水式电热恒温培养箱（PYα-DHS-40250）。
2方法
2.1将备用表面抗原阳性血清56℃、10小时灭活，离心取上清液；用表面抗原阴性血清梯度稀释表面抗原阳性血清，严格按试剂盒操作说明，找出本实验室cut off值2-3倍的稀释倍数，并与北京康彻思坦表面抗原临界值血清同测，测得稀释后血清OD=0.21、S/CO=2.0与北京康彻思坦表面抗原临界值血清OD =0.15、S/CO =1.4相近.即为弱阳性血清。
2.2将弱阳性血清按半年使用量配制，以100ul量分装至离心管中，-20℃冷冻保存。
结果
结论
1. 乙肝病毒表面抗原是诊断乙型肝炎的主要手段，目前，国内普遍使用ELISA定性法进行检测，ELISA定性法受反应温度、反应时间，交叉污染等多种因素影响，特别是对于低值弱阳性的判断缺乏统一标准，使得低值弱阳性结果不同实验室之间结果很难进行比较。为了解决这个问题，卫生部临检中心已经研制了用于进行HBsAg ELISA法检测国内标准品，该标准物质已在许多三级医院得到广泛的应用，但价格偏贵，在许多中小医院仍没得到广泛的推广。室内质控的目的是使实验室测定结果趋于稳定。它应贯穿于分析前、中、后全过程，通过室内质控，详细掌握各阶段的变异，才能不断提高检验质量。因此推广使用室内弱阳性质控极为重要。通过本实验室检测得出弱阳性血清S/CO值与北京康彻思坦表面抗原临界值血清S/CO值接近，处于受控范围之内，较为稳定，可作为乙型肝炎表面抗原临界值质控血清，确保实验的可靠性。
2. 将弱阳性血清作为弱阳性质控每日与室内质控和实验室样本同时检测，低值的阳性标本就不易漏检，确保检验结果的准确性。
3. 自制弱阳性血清简便易操作、重复性、稳定性好，用于室内质控有很好的适用性，价格低廉，特别适合州、县级医院。
参考文献
[1]范秀芹，林凌云，岳志蹦，等。ELISA测定表面抗原室内质控问题的探讨.中国煤炭工业医学杂志，2002，1：89-92.
[2]李金明，王露楠，徐锡霞，等。室內质量控制对乙型肝炎表面抗原测定准确度的影响.中华检验医学杂志，2001，24：255.
[3] 王露楠，吴建民，李金明，等。丙型肝炎病毒核酸检测的国家标准物质的研制. 中华检验医学杂志，2006，4：354-355.
乙肝病毒（HBV）的慢性携带者约占我国人群的10%～20%。乙肝病毒可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，部分患者可转为肝硬化甚至肝细胞癌（HCC），已成为严重的社会和公共卫生问题。乙型病毒性肝炎是我国发病率最高的疾病之一，而我省属于西部偏远地区，乙肝发病率也呈逐年上升趋势，而且高于全国平均水平。目前国内基本上采用ELISA法检测乙肝病毒表面抗原（HBsAg），但由于缺乏统一标准，国内目前并没有对免疫室内质控标准品—HBsAg的推广及普及，其临床诊断主要依赖临床检验，而检验结果的准确性取决于试剂质量和操作等因素，在实际操作中发现不同厂家生产的HBsAg试剂盒敏感性有差别，因而采用不同试剂检测得到的定性结果有较大差别，因此建立室内质控非常重要[1，2] 。商品性质控价格昂贵，运输不当造成质控效价降低，即州县级医院选择自制临界值质控大大降低了假阳性和假阴性结果的发生率，以适应日常检验工作[3]。
材料与方法
1.材料
1.1血清制备 收集临床及检验确诊为乙型病毒性肝炎患者血清，经检测为表面抗原阳性，无脂血、溶血、黄疸现象，清晰透明血清5ml。收集临床及检验结果为表面抗原阴性，无脂血、溶血、黄疸现象，清晰透明血清30ml。
1.2仪器 北京康彻思坦表面抗原临界值血清，批号为201208002，含量0.5IU/ml ；上海科华生物工程股份有限公司乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法），批号为201208052； Thermo Multiskan MK3酶标仪； Thermo DNα-9620A洗板机； 隔水式电热恒温培养箱（PYα-DHS-40250）。
2方法
2.1将备用表面抗原阳性血清56℃、10小时灭活，离心取上清液；用表面抗原阴性血清梯度稀释表面抗原阳性血清，严格按试剂盒操作说明，找出本实验室cut off值2-3倍的稀释倍数，并与北京康彻思坦表面抗原临界值血清同测，测得稀释后血清OD=0.21、S/CO=2.0与北京康彻思坦表面抗原临界值血清OD =0.15、S/CO =1.4相近.即为弱阳性血清。
2.2将弱阳性血清按半年使用量配制，以100ul量分装至离心管中，-20℃冷冻保存。
结果
结论
1. 乙肝病毒表面抗原是诊断乙型肝炎的主要手段，目前，国内普遍使用ELISA定性法进行检测，ELISA定性法受反应温度、反应时间，交叉污染等多种因素影响，特别是对于低值弱阳性的判断缺乏统一标准，使得低值弱阳性结果不同实验室之间结果很难进行比较。为了解决这个问题，卫生部临检中心已经研制了用于进行HBsAg ELISA法检测国内标准品，该标准物质已在许多三级医院得到广泛的应用，但价格偏贵，在许多中小医院仍没得到广泛的推广。室内质控的目的是使实验室测定结果趋于稳定。它应贯穿于分析前、中、后全过程，通过室内质控，详细掌握各阶段的变异，才能不断提高检验质量。因此推广使用室内弱阳性质控极为重要。通过本实验室检测得出弱阳性血清S/CO值与北京康彻思坦表面抗原临界值血清S/CO值接近，处于受控范围之内，较为稳定，可作为乙型肝炎表面抗原临界值质控血清，确保实验的可靠性。
2. 将弱阳性血清作为弱阳性质控每日与室内质控和实验室样本同时检测，低值的阳性标本就不易漏检，确保检验结果的准确性。
3. 自制弱阳性血清简便易操作、重复性、稳定性好，用于室内质控有很好的适用性，价格低廉，特别适合州、县级医院。
参考文献
[1]范秀芹，林凌云，岳志蹦，等。ELISA测定表面抗原室内质控问题的探讨.中国煤炭工业医学杂志，2002，1：89-92.
[2]李金明，王露楠，徐锡霞，等。室內质量控制对乙型肝炎表面抗原测定准确度的影响.中华检验医学杂志，2001，24：255.
[3] 王露楠，吴建民，李金明，等。丙型肝炎病毒核酸检测的国家标准物质的研制. 中华检验医学杂志，2006，4：354-355.