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【摘 要】本文研究不同浓度水杨酸（SA）对益母草植株生长的影响。方法：待益母草植株10 cm左右时，对其喷施不同浓度的SA溶液，叶喷7天后取样，测量益母草植株株高，叶片总叶绿素（SPAD）含量，叶片丙二醛（MDA）含量，过氧化物酶（POD）活性四个生理生化指标的变化。结果：SA浓度0.07-1.45mmol/L均能增加益母草植株株高，增加叶片总叶绿素含量，降低MDA含量，提高POD活性，有助于益母草植株的生长。结论：喷施0.72mmol/L的SA最有利于益母草植株生长。
【关键词】益母草；植株； 生长；水杨酸
1前言
本文以益母草植株为研究对象，探讨喷洒不同浓度水杨酸后，测量益母草植株株高，叶片总叶绿素（SPAD）含量，叶片丙二醛（MDA）含量，过氧化物酶（POD）活性生理生化指标的变化，旨在寻找益母草植株生长的最适宜SA浓度，有利于益母草植株的生长，以期为益母草的栽培、生产提供理论依据。
2材料与方法
2.1 材料
2.1.1实验时间及地点
实验于2009年4-5月在西华师范大学试验地和生物楼植物生理实验室进行。
2.1.2实验材料
益母草（Leonurus heterophyllus）种子购于南充会龙中药材种植有限公司，收获年份为2008年。
2.1.3 试剂及配制
2.1.3.1 试 剂
水杨酸（分析纯），蒸馏水，丙酮，80%丙酮，碳酸钙，石英砂，10%三氯乙酸，6%硫代巴比妥酸（TBA），愈创木酚，30%过氧化氢，20mmol/L KH2PO4，100mmol/L磷酸缓冲液（pH6.0），反应混合液。
2.1.3.2 试剂配制
（1）80%丙酮（现配现用）
取400ml丙酮于烧杯中，加100ml蒸馏水，缓慢振荡，500ml容量瓶中定容。则80%丙酮制成，即可备用。
（2）6%硫代巴比妥酸（TBA）
取0.6克硫代巴比妥酸（TBA），加入99.4ml10%三氯乙酸，缓慢振荡，100ml容量瓶中定容。则6%硫代巴比妥酸（TBA）制成，即可备用。
（3）反应混合液
100mmol/L磷酸缓冲夜（pH6.0）50ml，加入愈创木酚28ul，于磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液冷却后，加入30%过氧化氢19ul，混合均匀，保存于冰箱中，即可备用。
（4）浓度分别是：0，0.07，0.36，0.72，1.09，1.45mmol/L水杨酸（分析纯）水溶液（保存备用），用0mmol/L的蒸馏水作对照。
称取0.1g水杨酸（分析纯）溶于300ml蒸馏水中，缓慢振荡，500ml容量瓶中定容，即可制成浓度为1.45mmol/L水杨酸（分析纯）水溶液，其他水杨酸（分析纯）水溶液浓度通过稀释的方法制成，并在各个瓶上贴上标签，保存备用。
2.1.4实验器材
烧杯（500ml），移液管（5ml、2ml 、1ml），容量瓶（500ml、100ml），吸耳球，镊子，剪刀，研钵，漏斗，秒表，具塞试管，紫外可见分光光度计，电子分析天平（d=0.1mg），蒸馏水系统，台式离心机，JB-3定时恒温双向磁力搅拌器，数显恒温水浴锅。
2.2 实验方法
待益母草植株10 cm左右时，对其喷施不同浓度的SA溶液， 叶喷7天后取20株，测量益母草植株株高，叶片总叶绿素（SPAD）含量，叶片丙二醛（MDA）含量，过氧化物酶（POD）活性四个生理生化指标的变化。
2.2.2观察周期、次数
观察周期
喷洒水杨酸7天后，记录作记号植株的株高，采集其叶片，用来测量其总叶绿素（SPAD）含量，叶片丙二醛（MDA）含量，过氧化物酶（POD）活性生理生化指标。
观察次数
喷洒水杨酸3次。
2.3 测定方法
根据愈创木酚法。取光经lcm石英比色皿2只，于一只中加入反应混合液3mL，KH2PO41mL，作为校零对照，另一只中加入反应混合液3mL，酶液1mL，在470nm定吸光度，5min后记录吸光度值。以单位时间吸光度变化量计算POD活性，即以△OD470/min.g鲜重表示，每个样品重复3次。
2.4 分析方法
所有數据均采用Excel和SPSS进行处理。
3 结果分析
3.1不同SA浓度处理对益母草植株生长的影响
各浓度SA处理后的益母草植株株高都明显比对照组高，SA浓度从0.07-0.72mmol/L益母草植株株高逐渐增高，SA浓度从0.72-1.45mmol/L益母草植株株高逐渐降低。因此，不同浓度的水杨酸都能促进益母草的生长，但促进作用随着浓度的增加先增大后减小，在SA浓度0.72mmol/L达到最大。在SA浓度0.72mmol/L时，植株的株高值最大，比对照组分别大24.98%，30.23%，25.53%。即SA浓度为0.72mmol/L时最适合益母草植株生长。
3.2不同SA浓度处理对益母草叶片总叶绿素（SPAD）含量的影响
随着益母草植株的生长，其叶片总叶绿素（SPAD）的含量逐渐增多，水杨酸对叶片叶绿素含量有明显的影响，各浓度处理后的SPAD比对照组的含量高。0.07mmol/L的SA三次测量分别比对照组提高了13.11%，32.40%，0.07%；0.36mmol/L的SA三次测量分别比对照组提高了56.93%，34.81%，4.46%； 0.72mmol/L的SA三次测量分别比对照组提高了22.10%，44.58%，20.97%；1.09mmol/L的SA三次测量分别比对照组提高了16.48%，28.78%，19.03%；1.45mmol/L的SA三次测量分别比对照组提高了1.12%，16.73%，12.64%。SA浓度从0.07-0.72mmol/L益母草叶片SPAD的含量逐渐增加，在SA浓度0.72mmol/L达到最大值，SA浓度从0.72-1.45mmol/L益母草叶片SPAD的含量逐渐减少。因此，不同浓度的水杨酸都能提高益母草叶片叶绿素含量，有利于植株的生长。 3.3不同SA浓度处理对益母草叶片丙二醛（MDA）含量的影响
经SA喷施后，随益母草植株生长，叶片MDA含量减少，4月23日测量比对照组分别减少：0.88%，9.95%，39.38%，16.15%，12.39%；4月30日测量比对照组分别减少：9.16%，34.86%，40.46%，18.32%，12.98%；5月7日测量比对照组分别减少：36.41%，41.46%，49.58%，13.73%，11.48%。三次喷洒水杨酸后，益母草MDA含量都是在SA浓度为0.72mmol/L时最低。因此，益母草植株抗逆性在SA浓度0.72mmol/L时最强，最有利于益母草植株的生长。
3.4不同SA浓度处理对益母草过氧化物酶（POD）活性的影响
随着益母草植株的生长，其叶片的过氧化物活性（POD）都在增加。但是喷洒水杨酸之后，益母草叶片过氧化物活性都比对照组大，不同浓度的SA对益母草叶片过氧化物活性的影响不同，SA浓度为0.07mmol/L时，三次测量过氧化物酶活性分别比对照组大了200%，120%，100%；SA浓度为0.36mmol/L时，三次测量过氧化物酶活性分别比对照组大了230%，150%，162%；SA浓度为0.72mmol/L时，三次测量过氧化物酶活性分别对照组大了350%，220%，192%；SA浓度为1.09mmol/L时，三次测量过氧化物酶活性分别对照组大了167%，140%，92%；SA浓度为1.45mmol/L时，三次测量过氧化物酶活性分别对照组大了150%，90%，77%。但三次喷洒后测量都是在SA浓度为0.72mmol/L时，益母草叶片的POD活性比对照组增加的最多，POD活性最大，植株代谢最旺盛，最有利于益母草植株的生长。
3.5不同SA浓度处理对益母草生理生化的影响
0.07-1.45mmol/L水杨酸处理益母草植株后，三次测量植株株高都比对照组有所增高，叶片叶绿素含量和POD的活性比对照组均有所提高，叶片丙二醛含量比对照组有所降低。并且益母草植株株高、叶片叶绿素含量、过氧化物酶活性均在SA浓度0.72mmol/L时最大，叶片MDA含量在SA浓度0.72mmol/L时最低。因此，SA浓度为0.72mmol/L时，最有利于益母草植株的生长。
4讨 论
4.1水杨酸对益母草植株生长的影响
适宜浓度的外源SA能促进植物生长，但是SA浓度过高，就会抑制植株生长。本试验表明：浓度为0.07-1.45mmol/L的水杨酸都能促进益母草植株株高的生长，但益母草是草属植物，其茎杆不粗壮，如果植株过高，易倒伏，不利于植株生长。因此，喷洒适宜浓度外源SA才有利于益母草植株的生长。
4.2不同浓度SA对益母草植株生理生化的影响
本实验对益母草植株部分生理生化指标的变化进行了初步探讨，结果与前人的一致，为了更好的栽培益母草可以用SA浓度0.72mmol/L喷洒，但喷洒SA后益母草其他生理生化指标的变化还期有待进一步研究。
5总结
试验表明：外源喷施适宜浓度的水杨酸，能提高益母草叶片叶绿素含量和过氧化物酶活性，降低丙二醛含量，从而增强益母草对逆境的抵抗能力，有利于其植株生长，有利于益母草的栽培生产。然而SA介导的抗病反应是一个复杂的过程，在各种作物中诱导机制有所不同，在某些作物中的诱导机制已经比较清楚，但在益母草诱导机制上还很模糊，因此其诱导机制仍需进一步研究。
参考文献
[1]中国医学科学院药用植物资源开发研究所. 中国药用植物栽培学[M]. 农业出版社， 北京， 1991. 1065.
[2]陈瑛. 植物药种子手册[M]. 人民卫生出版社， 北京， 1998. 578.
[3]晁志， 周秀佳. 益母草类中药的研究概况和进中展[J]. 中草药， 1998， 29： 414-417.
[4]Raskin I. Role of salicylice acid in plants[J]. Annu Rev Plant Physiol， 1992， 43： 439-463.
[5]李德紅，潘瑞炽.酸在植物体内的作用[J].植物生理学通讯， 1995， 31（2）： 144-49.
[6]孙艳， 王鹏. 水杨酸对黄瓜抗高温胁迫能力的影响[J]. 西北植物学报， 2003， 23（11）： 2011-2013.
通讯作者：
王琼，西华师范大学生命科学学院
【关键词】益母草；植株； 生长；水杨酸
1前言
本文以益母草植株为研究对象，探讨喷洒不同浓度水杨酸后，测量益母草植株株高，叶片总叶绿素（SPAD）含量，叶片丙二醛（MDA）含量，过氧化物酶（POD）活性生理生化指标的变化，旨在寻找益母草植株生长的最适宜SA浓度，有利于益母草植株的生长，以期为益母草的栽培、生产提供理论依据。
2材料与方法
2.1 材料
2.1.1实验时间及地点
实验于2009年4-5月在西华师范大学试验地和生物楼植物生理实验室进行。
2.1.2实验材料
益母草（Leonurus heterophyllus）种子购于南充会龙中药材种植有限公司，收获年份为2008年。
2.1.3 试剂及配制
2.1.3.1 试 剂
水杨酸（分析纯），蒸馏水，丙酮，80%丙酮，碳酸钙，石英砂，10%三氯乙酸，6%硫代巴比妥酸（TBA），愈创木酚，30%过氧化氢，20mmol/L KH2PO4，100mmol/L磷酸缓冲液（pH6.0），反应混合液。
2.1.3.2 试剂配制
（1）80%丙酮（现配现用）
取400ml丙酮于烧杯中，加100ml蒸馏水，缓慢振荡，500ml容量瓶中定容。则80%丙酮制成，即可备用。
（2）6%硫代巴比妥酸（TBA）
取0.6克硫代巴比妥酸（TBA），加入99.4ml10%三氯乙酸，缓慢振荡，100ml容量瓶中定容。则6%硫代巴比妥酸（TBA）制成，即可备用。
（3）反应混合液
100mmol/L磷酸缓冲夜（pH6.0）50ml，加入愈创木酚28ul，于磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液冷却后，加入30%过氧化氢19ul，混合均匀，保存于冰箱中，即可备用。
（4）浓度分别是：0，0.07，0.36，0.72，1.09，1.45mmol/L水杨酸（分析纯）水溶液（保存备用），用0mmol/L的蒸馏水作对照。
称取0.1g水杨酸（分析纯）溶于300ml蒸馏水中，缓慢振荡，500ml容量瓶中定容，即可制成浓度为1.45mmol/L水杨酸（分析纯）水溶液，其他水杨酸（分析纯）水溶液浓度通过稀释的方法制成，并在各个瓶上贴上标签，保存备用。
2.1.4实验器材
烧杯（500ml），移液管（5ml、2ml 、1ml），容量瓶（500ml、100ml），吸耳球，镊子，剪刀，研钵，漏斗，秒表，具塞试管，紫外可见分光光度计，电子分析天平（d=0.1mg），蒸馏水系统，台式离心机，JB-3定时恒温双向磁力搅拌器，数显恒温水浴锅。
2.2 实验方法
待益母草植株10 cm左右时，对其喷施不同浓度的SA溶液， 叶喷7天后取20株，测量益母草植株株高，叶片总叶绿素（SPAD）含量，叶片丙二醛（MDA）含量，过氧化物酶（POD）活性四个生理生化指标的变化。
2.2.2观察周期、次数
观察周期
喷洒水杨酸7天后，记录作记号植株的株高，采集其叶片，用来测量其总叶绿素（SPAD）含量，叶片丙二醛（MDA）含量，过氧化物酶（POD）活性生理生化指标。
观察次数
喷洒水杨酸3次。
2.3 测定方法
根据愈创木酚法。取光经lcm石英比色皿2只，于一只中加入反应混合液3mL，KH2PO41mL，作为校零对照，另一只中加入反应混合液3mL，酶液1mL，在470nm定吸光度，5min后记录吸光度值。以单位时间吸光度变化量计算POD活性，即以△OD470/min.g鲜重表示，每个样品重复3次。
2.4 分析方法
所有數据均采用Excel和SPSS进行处理。
3 结果分析
3.1不同SA浓度处理对益母草植株生长的影响
各浓度SA处理后的益母草植株株高都明显比对照组高，SA浓度从0.07-0.72mmol/L益母草植株株高逐渐增高，SA浓度从0.72-1.45mmol/L益母草植株株高逐渐降低。因此，不同浓度的水杨酸都能促进益母草的生长，但促进作用随着浓度的增加先增大后减小，在SA浓度0.72mmol/L达到最大。在SA浓度0.72mmol/L时，植株的株高值最大，比对照组分别大24.98%，30.23%，25.53%。即SA浓度为0.72mmol/L时最适合益母草植株生长。
3.2不同SA浓度处理对益母草叶片总叶绿素（SPAD）含量的影响
随着益母草植株的生长，其叶片总叶绿素（SPAD）的含量逐渐增多，水杨酸对叶片叶绿素含量有明显的影响，各浓度处理后的SPAD比对照组的含量高。0.07mmol/L的SA三次测量分别比对照组提高了13.11%，32.40%，0.07%；0.36mmol/L的SA三次测量分别比对照组提高了56.93%，34.81%，4.46%； 0.72mmol/L的SA三次测量分别比对照组提高了22.10%，44.58%，20.97%；1.09mmol/L的SA三次测量分别比对照组提高了16.48%，28.78%，19.03%；1.45mmol/L的SA三次测量分别比对照组提高了1.12%，16.73%，12.64%。SA浓度从0.07-0.72mmol/L益母草叶片SPAD的含量逐渐增加，在SA浓度0.72mmol/L达到最大值，SA浓度从0.72-1.45mmol/L益母草叶片SPAD的含量逐渐减少。因此，不同浓度的水杨酸都能提高益母草叶片叶绿素含量，有利于植株的生长。 3.3不同SA浓度处理对益母草叶片丙二醛（MDA）含量的影响
经SA喷施后，随益母草植株生长，叶片MDA含量减少，4月23日测量比对照组分别减少：0.88%，9.95%，39.38%，16.15%，12.39%；4月30日测量比对照组分别减少：9.16%，34.86%，40.46%，18.32%，12.98%；5月7日测量比对照组分别减少：36.41%，41.46%，49.58%，13.73%，11.48%。三次喷洒水杨酸后，益母草MDA含量都是在SA浓度为0.72mmol/L时最低。因此，益母草植株抗逆性在SA浓度0.72mmol/L时最强，最有利于益母草植株的生长。
3.4不同SA浓度处理对益母草过氧化物酶（POD）活性的影响
随着益母草植株的生长，其叶片的过氧化物活性（POD）都在增加。但是喷洒水杨酸之后，益母草叶片过氧化物活性都比对照组大，不同浓度的SA对益母草叶片过氧化物活性的影响不同，SA浓度为0.07mmol/L时，三次测量过氧化物酶活性分别比对照组大了200%，120%，100%；SA浓度为0.36mmol/L时，三次测量过氧化物酶活性分别比对照组大了230%，150%，162%；SA浓度为0.72mmol/L时，三次测量过氧化物酶活性分别对照组大了350%，220%，192%；SA浓度为1.09mmol/L时，三次测量过氧化物酶活性分别对照组大了167%，140%，92%；SA浓度为1.45mmol/L时，三次测量过氧化物酶活性分别对照组大了150%，90%，77%。但三次喷洒后测量都是在SA浓度为0.72mmol/L时，益母草叶片的POD活性比对照组增加的最多，POD活性最大，植株代谢最旺盛，最有利于益母草植株的生长。
3.5不同SA浓度处理对益母草生理生化的影响
0.07-1.45mmol/L水杨酸处理益母草植株后，三次测量植株株高都比对照组有所增高，叶片叶绿素含量和POD的活性比对照组均有所提高，叶片丙二醛含量比对照组有所降低。并且益母草植株株高、叶片叶绿素含量、过氧化物酶活性均在SA浓度0.72mmol/L时最大，叶片MDA含量在SA浓度0.72mmol/L时最低。因此，SA浓度为0.72mmol/L时，最有利于益母草植株的生长。
4讨 论
4.1水杨酸对益母草植株生长的影响
适宜浓度的外源SA能促进植物生长，但是SA浓度过高，就会抑制植株生长。本试验表明：浓度为0.07-1.45mmol/L的水杨酸都能促进益母草植株株高的生长，但益母草是草属植物，其茎杆不粗壮，如果植株过高，易倒伏，不利于植株生长。因此，喷洒适宜浓度外源SA才有利于益母草植株的生长。
4.2不同浓度SA对益母草植株生理生化的影响
本实验对益母草植株部分生理生化指标的变化进行了初步探讨，结果与前人的一致，为了更好的栽培益母草可以用SA浓度0.72mmol/L喷洒，但喷洒SA后益母草其他生理生化指标的变化还期有待进一步研究。
5总结
试验表明：外源喷施适宜浓度的水杨酸，能提高益母草叶片叶绿素含量和过氧化物酶活性，降低丙二醛含量，从而增强益母草对逆境的抵抗能力，有利于其植株生长，有利于益母草的栽培生产。然而SA介导的抗病反应是一个复杂的过程，在各种作物中诱导机制有所不同，在某些作物中的诱导机制已经比较清楚，但在益母草诱导机制上还很模糊，因此其诱导机制仍需进一步研究。
参考文献
[1]中国医学科学院药用植物资源开发研究所. 中国药用植物栽培学[M]. 农业出版社， 北京， 1991. 1065.
[2]陈瑛. 植物药种子手册[M]. 人民卫生出版社， 北京， 1998. 578.
[3]晁志， 周秀佳. 益母草类中药的研究概况和进中展[J]. 中草药， 1998， 29： 414-417.
[4]Raskin I. Role of salicylice acid in plants[J]. Annu Rev Plant Physiol， 1992， 43： 439-463.
[5]李德紅，潘瑞炽.酸在植物体内的作用[J].植物生理学通讯， 1995， 31（2）： 144-49.
[6]孙艳， 王鹏. 水杨酸对黄瓜抗高温胁迫能力的影响[J]. 西北植物学报， 2003， 23（11）： 2011-2013.
通讯作者：
王琼，西华师范大学生命科学学院