【摘 要】
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通过设计４个引物进行重叠（ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ）ＰＣＲ，由此克隆了人肿瘤坏死因子受体Ｉ死亡域（ｄｅａｔｈｄｏｍａｉｎ）与氯霉素乙酰转移酶（ＣＡＴ）的融合蛋白基因（ＤｄＬｃａｔ）。该融合蛋白基因经测序，证明与设计的序列相同。构建成的重组表达质粒ｐＬＴ１０ＤｄＬｃａｔ转化大肠
【机 构】
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复旦大学遗传学研究所遗传工程国家重点实验室; 比利时根特大学分子生物学实验室;
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通过设计４个引物进行重叠（ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ）ＰＣＲ，由此克隆了人肿瘤坏死因子受体Ｉ死亡域（ｄｅａｔｈｄｏｍａｉｎ）与氯霉素乙酰转移酶（ＣＡＴ）的融合蛋白基因（ＤｄＬｃａｔ）。该融合蛋白基因经测序，证明与设计的序列相同。构建成的重组表达质粒ｐＬＴ１０ＤｄＬｃａｔ转化大肠杆菌后发酵，ＩＰＴＧ诱导２ｈ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定ＤｄＬｃａｔ蛋白质的分子量为３９ｋＤ。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹实验进一步作了鉴定。表达产物大部分为包涵体。ＤｄＬｃａｔ经Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱层析后纯度大于９５％。
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