【摘 要】
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目的 观察反义封闭Chk1和/或Chk2基因,阻断细胞周期检测点信号传导通路对胶质瘤H4细胞放疗后细胞周期和凋亡的影响,评价Chk1和Chk2基因作为肿瘤治疗靶点的有效性.方法 流式细胞仪检测不同剂量60 Co照射引起的H4细胞周期和凋亡的动力学特点,以建立G2/M期细胞周期阻滞模型;Western blot法检测转染Chk1和Chk2正、反义寡核苷酸后,细胞内Chk1和Chk2蛋白表达;Anne
【机 构】
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目的 观察反义封闭Chk1和/或Chk2基因,阻断细胞周期检测点信号传导通路对胶质瘤H4细胞放疗后细胞周期和凋亡的影响,评价Chk1和Chk2基因作为肿瘤治疗靶点的有效性.方法 流式细胞仪检测不同剂量60 Co照射引起的H4细胞周期和凋亡的动力学特点,以建立G2/M期细胞周期阻滞模型;Western blot法检测转染Chk1和Chk2正、反义寡核苷酸后,细胞内Chk1和Chk2蛋白表达;AnnexinV-PI法检测单转染或联合转染Chk1/2反义寡核苷酸对放疗后H4细胞凋亡的影响.结果 不同剂量的60co照射可引起H4细胞G2/M期阻滞,以10 Gy 60C0照射12h G2/M期阻滞最明显;单独反义封闭Chk1或Chk2基因可增强放疗后凋亡敏感性100%～200%,而同时反义封闭Chk1和Chk2基因具有协同作用,增强放疗后凋亡敏感性300%,其机制是通过解除G2/M期阻滞实现的.结论 放疗可激活细胞周期检测点信号传导通路导致放疗抵抗,而阻断该信号通路的关键激酶Chk1和Chk2可显著增强放疗后凋亡敏感性。
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