【摘 要】
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【目的】β-葡萄糖苷酶可用于酶法生产龙胆低聚糖。为了给龙胆低聚糖的生产提供大量的酶来源,构建基因工程菌表达黑曲霉(CMI CC324626)β-葡萄糖苷酶基因(bgl)并研究重组酶生
【机 构】
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江南大学食品科学与技术国家重点实验室; 江南大学生物工程学院,工业生物技术教育部重点实验室;
【基金项目】
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国家杰出青年基金(20625619);食品科学与技术国家重点实验室科研基金(SKLF-MB-200802)~~
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【目的】β-葡萄糖苷酶可用于酶法生产龙胆低聚糖。为了给龙胆低聚糖的生产提供大量的酶来源,构建基因工程菌表达黑曲霉(CMI CC324626)β-葡萄糖苷酶基因(bgl)并研究重组酶生产龙胆低聚糖的工艺条件。【方法】将bgl克隆到表达载体pPIC9K,转化毕赤酵母(Pichia pastoris)KM71。表达产物通过HPLC和LC-MS鉴定了其可用于生产龙胆低聚糖的转苷活性,并对酶转化葡萄糖生产龙胆低聚糖的反应条件进行了优化。【结果】实现了β-葡萄糖苷酶的过量表达。当底物葡萄糖浓度为80%,反应pH4.5,温度为60℃,加酶量为每克葡萄糖60U,添加1mmol/L的K+,转化周期为48h,龙胆低聚糖累计达到最大为50g/L。【结论】本研究是国内外首次利用重组酶酶法生产龙胆低聚糖的报道。
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