【摘 要】
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目的 探讨miR-181a调控PTEN诱导激酶1（PINK1）/帕金森病相关基因（Parkin）通路对骨质疏松（OP）大鼠破骨细胞线粒体自噬的影响。方法 健康雌性SD大鼠20只随机分为骨质疏松症（OP）模型组（n=10）与对照组（n=10）。OP模型组大鼠制备OP模型。提取OP大鼠破骨细胞，设置OP组（未转染）、si-miR-181a组（转染si-miR-181a载体质粒）、si-NC组（转染si
【基金项目】
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浙江省医药卫生科技计划项目（2021KY358）；
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目的 探讨miR-181a调控PTEN诱导激酶1（PINK1）/帕金森病相关基因（Parkin）通路对骨质疏松（OP）大鼠破骨细胞线粒体自噬的影响。方法 健康雌性SD大鼠20只随机分为骨质疏松症（OP）模型组（n=10）与对照组（n=10）。OP模型组大鼠制备OP模型。提取OP大鼠破骨细胞，设置OP组（未转染）、si-miR-181a组（转染si-miR-181a载体质粒）、si-NC组（转染si-NC阴性对照质粒）、ad-miR-181a组（转染ad-miR-181a载体质粒）与ad-NC组（转染阴性ad-NC对照质粒），对照组大鼠破骨细胞正常培养，设为正常对照组。采用RT-PCR检测miR-181a的表达，MTT法及流式细胞术检测破骨细胞存活及凋亡情况，透射电镜观察线粒体自噬情况，免疫荧光共定位检测线粒体中Parkin的表达情况，Western blotting检测PINK1/Parkin及自噬、凋亡相关蛋白的表达情况。敲低OP大鼠破骨细胞miR-181a后下调Parkin的表达，验证Parkin对miR-181a的逆转作用。双荧光素酶报告实验验证miR-181a与Parkin的靶向调控关系。结果 与正常对照组相比，OP组破骨细胞中miR-181a（1.59±0.15 vs. 1.02±0.11）、Parkin+TOMM2+（2.02±0.20 vs. 0.13±0.10）、Parkin（1.83±0.18 vs. 1.13±0.10）、PINK1（1.93±0.19 vs. 1.03±0.10）、自噬标志蛋白LC3-II/I（1.89±0.18 vs. 1.15±0.10）表达水平及存活率（157.06%±12.32% vs. 100.09%±0.05%）升高（P<0.05）。与OP组相比，上调OP大鼠破骨细胞中miR-181a的表达后，细胞存活率（222.96%±22.15%）升高，Parkin+TOMM2+（1.01±0.11）、LC3-II/I（1.36±0.12）及凋亡率（3.28%±0.35%）降低（P<0.05）；下调OP大鼠破骨细胞中miR-181a的表达后，细胞存活率（106.96%±10.15%）降低，Parkin+TOMM2+（2.97±0.29）、LC3-II/I（2.47±0.24）表达及凋亡率（19.71%±1.83%）升高（P<0.05）。双荧光素酶报告试验结果显示，Parkin为miR-181a的靶基因。下调Parkin的表达可逆转miR-181a低表达发挥的促进线粒体自噬及抑制细胞存活的作用（P<0.05）。结论 上调OP大鼠破骨细胞中miR-181a的表达，可靶向下调Parkin的表达，抑制线粒体自噬激活，促进破骨细胞存活。
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