【摘 要】
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目的:研究三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞来源的外泌体对巨噬细胞极化作用以及经外泌体活化的巨噬细胞对TNBC细胞迁移和侵袭能力的影响及作用机制.方法:提取TNBC细胞BT-549和MDA-MB-231外泌体,透射电镜、纳米颗粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)、蛋白质印记(Western blot)鉴定外泌体;流式细胞术检测经外泌体处理后巨噬细胞分子标志物CD206、CD80的表达;实时荧光定量PCR检测
【机 构】
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广西壮族自治区人民医院内分泌代谢干部病区·老年内分泌代谢科,广西 南宁 530022;广西壮族自治区人民医院临床肿瘤中心肿瘤内科一区,广西医学科学院肿瘤研究所,广西 南宁 530022
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目的:研究三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞来源的外泌体对巨噬细胞极化作用以及经外泌体活化的巨噬细胞对TNBC细胞迁移和侵袭能力的影响及作用机制.方法:提取TNBC细胞BT-549和MDA-MB-231外泌体,透射电镜、纳米颗粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)、蛋白质印记(Western blot)鉴定外泌体;流式细胞术检测经外泌体处理后巨噬细胞分子标志物CD206、CD80的表达;实时荧光定量PCR检测单核细胞THP-1、巨噬细胞M0及外泌体处理后巨噬细胞中CD163、转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,iNOS)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)的mRNA水平;Transwell实验分析外泌体活化的巨噬细胞对TNBC细胞迁移和侵袭的影响,Western blot方法检测MMP-2、MMP-9、N-cadherin、E-cadherin的蛋白水平.结果:透射电镜下BT-549和MDA-MB-231细胞的外泌体具有膜结构囊状小泡并表达外泌体的分子标记物CD81、CD63;BT-549细胞来源的外泌体直径分布为80～150 nm,MDA-MB-231细胞来源的外泌体直径分布为100～200 nm;经BT-549和MDA-MB-231细胞源性外泌体处理的巨噬细胞与M0相比,CD206均有稳定表达(P<0.05),而CD80表达未见明显差异;外泌体处理后巨噬细胞的CD163、TGF-βmRNA表达水平均增加(P<0.01),iNOS mRNA表达水平降低(P<0.05),TNF-αmRNA表达水平未见明显变化;外泌体处理后的巨噬细胞使得TNBC细胞的迁移、侵袭穿膜数目增加(P<0.01),N-cadherin、MMP-2和MMP-9蛋白表达增加(P<0.05),E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05).结论:TNBC细胞分泌的外泌体可以诱导巨噬细胞向M2极化,进而促进TNBC细胞间质转化,增强TNBC细胞的迁移和侵袭能力.
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