【摘 要】
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目的 利用小干扰RNA(siRNA)抑制CC趋化因子受体5(CCR5)的表达,以探讨CCR5 siRNA对类风湿关节炎(RA)大鼠滑膜细胞增殖与细胞周期的影响及其可能机制.方法 采用胶原诱导法构建RA大鼠模型,分离和培养RA大鼠滑膜细胞,通过Lipofectamine 2000将CCR5 siRNA和NC siRNA载体转染入细胞以判断其转染效率.并将体外培养的滑膜细胞分为4组:RA组(RA大鼠滑膜细胞)、RA+NC组(加入脂质体包裹的NC siRNA)、RA+mock组(加入脂质体)、RA+siRNA组
【机 构】
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西南医科大学附属中医医院检验科 泸州646000;西南医科大学附属医院风湿免疫科 泸州 646000
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目的 利用小干扰RNA(siRNA)抑制CC趋化因子受体5(CCR5)的表达,以探讨CCR5 siRNA对类风湿关节炎(RA)大鼠滑膜细胞增殖与细胞周期的影响及其可能机制.方法 采用胶原诱导法构建RA大鼠模型,分离和培养RA大鼠滑膜细胞,通过Lipofectamine 2000将CCR5 siRNA和NC siRNA载体转染入细胞以判断其转染效率.并将体外培养的滑膜细胞分为4组:RA组(RA大鼠滑膜细胞)、RA+NC组(加入脂质体包裹的NC siRNA)、RA+mock组(加入脂质体)、RA+siRNA组(加入脂质体包裹的CCR5 siRNA).利用RNA干扰技术抑制RA大鼠滑膜细胞CCR5的表达后,再用qRT-PCR和Western Blot检测各组滑膜细胞CCR5、细胞周期相关基因(Cyclin D1、Cyclin E1、Cyclin B1)mRNA和蛋白表达情况;MTT检测各组滑膜细胞增殖情况;PI单染检测滑膜细胞细胞周期分布情况.结果 与RA组比较,RA+siRNA组CCR5 mRNA表达水平(1.16±0.21)比(1.85±0.61)、CCR5蛋白水平(0.19±0.01)比(0.44±0.05)均明显降低(P<0.05);RA+siRNA组Cy?clin D1、Cyclin E1、Cyclin B1 mRNA水平(1.32±0.01)、(1.23±0.26)、(1.33±0.05)分别较RA组(1.52±0.06)、(1.68±0.08)、(1.94±0.07)显著降低(P<0.05);RA+siRNA组Cyclin D1、Cyclin E1、Cyclin B1蛋白水平(0.88±0.03)、(1.46±0.13)、(1.56±0.13)分别较RA组(1.38±0.03)、(1.98±0.12)、(2.13±0.08)明显降低(P<0.05);与RA组比较,RA+siRNA组RA大鼠滑膜细胞G0/G1期比例(70.27±1.06)％较(59.26±0.59)％上升(P<0.05),S期比例(14.10±0.82)％较(23.94±1.71)％降低(P0.05).结论 CCR5基因沉默可抑制滑膜细胞的生长,使G0/G1期滑膜细胞比例增加,S期细胞比例减少,还可通过调节细胞周期相关基因Cyclin D1、Cyclin E1、Cyclin B1的表达来调节细胞周期的分布,进而影响滑膜细胞的增殖.
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