为研制一种快速猪乙型脑炎病毒抗体检测试剂盒,本研究参照已发表的JEV(乙型脑炎病毒)基因组序列,RT-PCR扩增了长约1 000 bp的E基因片段,连接pET30a表达载体后获得了以包涵体形式表达的重组E蛋白,以该蛋白作为诊断抗原,研制了检测乙型脑炎病毒抗体的间接ELISA(酶联免疫吸附试验)诊断试剂盒。该试剂盒与其它7种常见猪病病毒(圆环病毒2型、伪狂犬病病毒、蓝耳病病毒、细小病毒、流行性腹泻病毒、传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒)的阳性血清不发生交叉反应;批内重复性试验的变异系数小于5%,批间重复性试验的变异系数小于10%;与HI(血凝抑制试验)相比,符合率、敏感性和特异性分别为83.1%、84.3%和80.0%。本研究制备的重组蛋白具有良好的反应活性,以其作为包被抗原研制的JEV E-ELISA诊断试剂盒具有良好的重复性、敏感性和特异性,为JEV的快速诊断、免疫猪群抗体监测和JEV流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断试剂盒。