【摘 要】
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背景:肝癌干细胞是肝癌不断发生发展和高异质性产生的关键细胞,目前尚无针对肝癌干细胞相关自噬通路为靶点的中药复方研究,因此中药复方抑制肝癌干细胞自噬的研究十分具有必要性.目的:探讨中药复方制剂敷和备化方对CD133+HepG2肝癌干细胞PI3K/AKT/mTOR通路及相关自噬蛋白影响的机制.方法:免疫磁珠法分选出CD133+HepG2细胞,用体积分数为2％,4％,8％,16％敷和备化方含药血清作用CD133+HepG2细胞,CCK-8法检测细胞增殖活力,选出最佳干预体积分数的敷和备化方含药血清.将CD133
【机 构】
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广西中医药大学,广西壮族自治区南宁市 530023;深圳市宝安纯中医治疗医院,广东省深圳市 518100
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背景:肝癌干细胞是肝癌不断发生发展和高异质性产生的关键细胞,目前尚无针对肝癌干细胞相关自噬通路为靶点的中药复方研究,因此中药复方抑制肝癌干细胞自噬的研究十分具有必要性.目的:探讨中药复方制剂敷和备化方对CD133+HepG2肝癌干细胞PI3K/AKT/mTOR通路及相关自噬蛋白影响的机制.方法:免疫磁珠法分选出CD133+HepG2细胞,用体积分数为2％,4％,8％,16％敷和备化方含药血清作用CD133+HepG2细胞,CCK-8法检测细胞增殖活力,选出最佳干预体积分数的敷和备化方含药血清.将CD133+HepG2细胞分为血清对照组、空白对照组、雷帕霉素组和敷和备化方组,分别用含体积分数16％空白大鼠血清的DMEM/F12培养基、无血清DMEM/F12培养基、含0.05％雷帕霉素的DMEM/F12培养基、含体积分数16％敷和备化方含药血清的DMEM/F12培养基培养.流式细胞术检测各组CD133+HepG2肝癌干细胞百分比;RT-PCR法检测各组细胞中PI3K、AKT、mTOR、LC3-Ⅱ、Beclin-1的mRNA表达水平;Western blot法检测各组细胞中PI3K、p-AKT、AKT、p-mTOR、mTOR、LC3-Ⅱ的蛋白表达水平;免疫荧光法检测各组细胞中LC3、LC3-Ⅱ的表达水平.结果 与结论:①敷和备化方含药血清有抑制CD133+HepG2细胞增殖的作用,其中体积分数为16％敷和备化方含药血清干预72 h抑制作用最明显(P<0.05);②与血清对照组、空白对照组相比,敷和备化方组和雷帕霉素组CD133+HepG2细胞百分比下降(P<0.05),PI3K、AKT、p-mTOR、mTOR、LC3-Ⅱ的蛋白表达水平均明显下调(P<0.05);PI3K、AKT、mTOR、LC3-Ⅱ、Beclin-1的mRNA表达水平均明显下调(P<0.05);LC3、LC3-Ⅱ的荧光信号强度均明显下调(P<0.05);③与雷帕霉素组相比,敷和备化方组CD133+HepG2细胞中的PI3K、p-AKT、AKT、p-mTOR、mTOR、LC3-Ⅱ蛋白表达水平均明显下调(P<0.05),PI3K、AKT、mTOR、LC3-Ⅱ、Beclin-1的mRNA表达水平均明显下调(P<0.05),LC3、LC3-Ⅱ的荧光信号强度均明显下调(P<0.05);④结果表明,敷和备化方能抑制肝癌干细胞自噬和增殖,其机制与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路有关.
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