【摘 要】
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目的 构建针对血管内皮生长因子（VEGF）的慢病毒干扰载体,检测沉默VEGF基因后对宫颈癌细胞C33A凋亡的影响。方法 通过对细胞感染复数（MOI）和病毒感染效率的测定,探索感染C33A细胞的最佳病毒浓度和促感染药物聚凝胺（Polybrene）的使用剂量,遂按照此最佳感染条件,将处于对数生长期的C33A细胞分为3组:空白对照组、阴性对照组（使用含有无意义链shRNA-scr的慢病毒载体感染）和实验
【机 构】
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西安交通大学第一附属医院肿瘤放疗科
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（81602676）；
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目的 构建针对血管内皮生长因子（VEGF）的慢病毒干扰载体,检测沉默VEGF基因后对宫颈癌细胞C33A凋亡的影响。方法 通过对细胞感染复数（MOI）和病毒感染效率的测定,探索感染C33A细胞的最佳病毒浓度和促感染药物聚凝胺（Polybrene）的使用剂量,遂按照此最佳感染条件,将处于对数生长期的C33A细胞分为3组:空白对照组、阴性对照组（使用含有无意义链shRNA-scr的慢病毒载体感染）和实验组（使用含有VEGF-shRNA的慢病毒载体感染）,然后检测C33A细胞中VEGF蛋白表达的差异,流式细胞术检测干扰后C33A细胞的凋亡情况。结果C33A细胞的慢病毒MOI为50,且使用5μg/ml的Polybrene时,慢病毒感染对C33A细胞无明显细胞毒性并达到最佳感染效果。成功感染慢病毒后,实验组C33A细胞VEGF蛋白的相对表达量较阴性对照组明显降低（23.3%±1.2%vs 96.7%±1.8%,P＜0.05）。实验组C33A细胞凋亡率明显高于阴性对照组（46.03%±0.83%vs 15.26%±0.87%,P＜0.05）。结论 沉默宫颈癌细胞C33A的VEGF基因可下调VEGF蛋白的表达导致C33A细胞的凋亡。
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