【摘 要】
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目的构建血管内皮生长因子(VEGF)基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,为其体内外实验研究提供依据。方法将靶向VEGF基因的shRNA表达序列连接到慢病毒载体pRNAT-U6.2/Lenti中,获得pR
【机 构】
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苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所,江苏苏州
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目的构建血管内皮生长因子(VEGF)基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,为其体内外实验研究提供依据。方法将靶向VEGF基因的shRNA表达序列连接到慢病毒载体pRNAT-U6.2/Lenti中,获得pRNAT-shVEGF质粒,经PCR和测序鉴定后,与慢病毒包装质粒pPACKH1通过Lipofectamine 2000共转染至包装细胞293T,包装产生病毒液,测定其滴度。结果PCR扩增和测序结果证实,VEGFshRNA核苷酸链序列插入正确,包装慢病毒产生病毒悬液的滴度为3×107pfu/ml。
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