【摘 要】
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目的:构建重组pEGFP-HSP70质粒并观察其在神经干细胞中的表达。方法:采用RT-PCR方法从SD胎鼠肝组织中获取总RNA,扩增出热休克蛋白70(HSP70)基因的全序列cDNA,并克隆到含有增
【基金项目】
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国家重点基础研究发展计划(973计划)(No.2011CB707504);广州市科学与技术重大专项(No.11BppZXaa2070006)
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目的:构建重组pEGFP-HSP70质粒并观察其在神经干细胞中的表达。方法:采用RT-PCR方法从SD胎鼠肝组织中获取总RNA,扩增出热休克蛋白70(HSP70)基因的全序列cDNA,并克隆到含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的真核表达载体pEGFP-C2上,经EcoRⅠ、BamHⅠ酶切及测序分析对重组质粒pEGFP-HSP70进行鉴定。采用Nucleofector转染技术将重组质粒pEGFP-HSP70转染至胎鼠神经干细胞中。结果:(1)胎鼠HSP70 cDNA序列被正确地克隆到真核表达载体pEGFP-C2中,成功构建重组大鼠pEGFP-HSP70质粒。荧光强度检测空质粒转染组(pEGFP-C2组)、pEGFP-HSP70组与对照组相比显著升高(P<0.01);pEGFP-HSP70组内24 h的荧光强度与7 d(P<0.05)、14 d(P<0.05)和21 d(P<0.01)相比降低明显。(2)转染后HSP70的表达在1 d(P<0.05)、7 d(P<0.01)和14 d(P<0.01)与对照组相比均明显升高。结论:神经干细胞可直接作为基因靶细胞,能有效地表达重组质粒pEGFP-HSP70,且HSP70在神经干细胞中的表达与转染时间密切相关。
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