【摘 要】
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为探讨肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophage,TAM)外泌体促进胃癌细胞发生免疫逃逸的机制,采用体外诱导M2型巨噬细胞的方法模拟TAM,通过超速离心法提取M2型巨噬细胞
【机 构】
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上海交通大学医学院附属新华医院检验科,上海200082
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为探讨肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophage,TAM)外泌体促进胃癌细胞发生免疫逃逸的机制,采用体外诱导M2型巨噬细胞的方法模拟TAM,通过超速离心法提取M2型巨噬细胞外泌体(M2 macrophages'exosome,M2e),并与胃癌细胞共培养以获得摄取了M2e的胃癌细胞,再与CD8+T细胞进行共培养.使用天冬氨酸半胱氨酸特异性蛋白酶(cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase)-3/7的荧光底物和AnnexinV-7-氨基放线菌素D(7-amino-actinomycin D,7-AAD)试剂检测胃癌细胞的凋亡情况,以评估T细胞的杀伤作用.利用MicroArray技术深入探索M2e影响胃癌细胞的信号通路,并用RT-PCR、Western blotting和流式细胞术对这一信号通路进行进一步的验证.结果显示,胃癌细胞能大量摄取M2e.相比未摄取M2e的胃癌细胞,摄取了M2e的胃癌细胞与活化T细胞共培养后,凋亡比例下降,说明其能减弱CD8+T细胞的杀伤作用.MicroArray结果显示,摄取了M2e的胃癌细胞IFN通路被广泛激活.IFN通路激活能促进胃癌细胞表达PD-L1,进而使活化的CD8+T细胞的杀伤功能减弱,因此胃癌细胞产生了免疫逃逸.该研究揭示,巨噬细胞与胃癌细胞的信息交互作用使胃癌细胞产生了抗免疫杀伤作用,胃癌细胞免疫逃逸可能与TAM外泌体有潜在联系.
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