NEFL通过激活EGFR/AKT/S6信号通路促进食管鳞癌细胞的侵袭迁移

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为探讨神经丝轻链(neurofilament light chain,NEFL)在食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)中的表达情况及作用机制,本研究首先对食管鳞癌组织及配对的正常食管上皮中NEFL的m RNA和蛋白表达情况进行了检测。基因表达综合数据库(Gene Expression Omnibus, GEO) RNA表达数据,以及临床标本的实时荧光定量逆转录-聚合酶链式反应(real-time quantitative reverse transcription PCR, qRT-PCR)分析结果显示,与正常食管上皮组织相比,食管鳞癌组织中NEFL基因m RNA水平明显升高。Western blot分析结果显示,与正常食管上皮组织相比,食管鳞癌组织中NEFL蛋白水平也明显升高。进一步采用CCK8法和Transwell法检测NEFL过表达对食管鳞癌细胞恶性表型的影响,结果显示敲降NEFL后,食管癌细胞的侵袭和迁移能力显著减弱。体内裸鼠成瘤实验显示,敲降NEFL可显著抑制肿瘤生长。分子水平检测表明,敲降NEFL显著升高上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)相关分子E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达并降低N-钙黏蛋白(N-cadherin)的表达、下游分子表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)的m RNA和蛋白的表达水平,蛋白激酶B (protein kinase B, PKB;又被称为AKT)和核糖体蛋白S6 (ribosomal protein S6)的磷酸化水平也显著降低。NEFL敲降细胞后转染EGFR过表达载体,AKT和S6的磷酸化水平以及食管癌细胞侵袭和迁移表型都得以恢复。以上研究结果表明,NEFL过表达可能通过激活EGFR/AKT/S6信号通路促进食管鳞癌细胞EMT,最终促进食管鳞癌细胞的侵袭迁移。
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